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油茶DGAT1基因的全长cDNA克隆与原核表达的中期报告
本实验旨在克隆油茶DGAT1基因的全长cDNA并进行原核表达，在实验中已完成以下工作：
1. 设计引物
通过对已公布的油茶DGAT1基因序列进行序列比对，设计出一组全长cDNA扩增引物，包括：
Forward primer：5’-ATGAGCAGCGGACGACGAC-3’
Reverse primer：5’-TTAGCAGCCGGTTGAGCGGTC-3’
2. 克隆扩增
采用油茶叶片RNA为模板，使用RT-PCR技术扩增目标基因，扩增条件为：94 ℃ 3min；94 ℃ 30s，57 ℃ 30s，72 ℃ 1min，共35个循环；72℃ 10min。扩增出了约2.5 kb的片段。
3. 克隆检测
对扩增出的片段进行测序并进行序列比对，结果表明克隆得到的片段长度为2.5 kb，与已公布的油茶DGAT1基因序列高度一致。
4. 原核表达
将克隆得到的油茶DGAT1基因插入到原核表达载体pET28a中，正确性及方向性进行了验证，并转化到大肠杆菌表达菌BL21(DE3)中进行表达。已完成菌液培养及蛋白表达提取等基本操作，并进行了初步纯化。
目前实验进展顺利，下一步将进行蛋白的进一步纯化及功能表征，以期深入研究油茶DGAT1基因的功能及其在油茶生长发育及油脂合成中的作用。
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