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动物分子病原学复习思考题 2 举例阐述动物病原菌基因组学研究的意义。 应用现代分子生物学的理论和技术，从分子、基因、基因调控和 表达水平上探讨和研究动物病原（细菌、病毒）生命活动的基本现象 和本质的一门学科，进而从本质上揭示病原体的生长繁殖、遗传变异、 致病性、抗原性、耐药性等发生发展规律，为动物传染病的诊断与防 制提供依据，为人工设计、改造和利用病原造福畜牧业和人类。 细菌的基因组学 对细菌的全基因组进行核苷酸测定，在了解全基因的结构基础上， 研究各个基因单独或数个基因间相互作用功能的一门学科 病原细菌基因组学的意义 1 重要致病与毒力基因的发现与研究 寻找灵敏及特异的病原分子标记——发现细菌的特异 DNA序列 ， 提高临床诊断的效率和准确性 2 促进新药的发现和疫苗的发展 识别和筛选药物靶位——微生物基因上的药物靶位 （靶基因）一 般是一些毒力相关基因、微生物生存必需基因、种特异性基因、某些 酶基因和膜转运蛋白基因等 3 提高对人类相关基因功能的认识 4 细菌基因组的研究为生命科学开辟了新的研究领域——生物信 息学、比较基因组学等 病毒基因组学研究的意义 1 测定与鉴定未知基因序列 2 确定重组 DNA 的方向与结构 3 对突变（变异）进行定位和鉴定 4 病毒的利用 5 基因的功能 6 分子流行病学研究 举例阐述病毒基因组学研究涉及的工作及其科学意义。 1 病毒基因组序列测定 DNA 序列分析自动系统 PCR 、RT-PCR＆RACE 参考 GenBank 已知部分序列设计引物扩增重叠片段；随机引物扩 增基因组特异片段，进行序列分析（ BLAST ）后，设计引物扩增重叠 片段 应用 RACE 技术扩增基因组的 5’末端（3’末端也可用 RACE 法 得到真实序列 分片段扩增、克隆。测序后，进行序列的拼接基因组的 5’末端序 列应用 RACE 法得到真实序列 2.病毒基因组的分析 基因组核苷酸一级结构 基因组结构分析 分析基因的开放读框（ORF ） 以核苷酸顺序推测相应蛋白质的氨基酸顺序及二级结构、表位预 测 分析结构蛋白基因与非结构蛋白基因 序列相似性比较 毒株间的差异与变异情况，病毒基因型的分析 遗传进化、演化规律 分子流行病学研究 以你熟悉的一种动物细菌为例，阐述开展其致病性分子机制研究 的思路。以志贺菌为例叙述大概的致病性分子机制研究思路 ：1 首先研 究志贺菌的侵入机体的机制 A 细菌黏附与定居的分子基础 细菌的黏附素：细菌特异性黏附于不同的宿主细胞 ，不仅对病原 与宿主的早期接触 ，而且对整个感染过程都很重要 ，许多细菌多可黏 附于宿主黏膜的上皮细胞 ，并在局部增殖 ，而且在感染过程中都停留 在细胞表面 ，所以首先研究志贺菌是怎样黏附到结肠黏膜上的进行有 效的增殖。现在结果可能比较清楚与该菌的Ⅲ型分泌系统有关。其上 的菌毛可与宿主细胞的受体分子特异性结合，特别是与细胞表面的多 糖侧链结合 侵入的受体：细胞膜上的整合素 宿主细胞膜上的整合素是细菌侵袭素等的受体，与细菌侵入细胞 密切相关 整合素广泛分布于上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞及 T 细胞等 细胞的一种跨膜蛋白。整合素主要识别配体分子上的精氨酸-甘氨酸- 天门冬氨酸（RGD ）结构 细菌侵袭素无 RGD ，但能与含β1 链的整合素紧密结合 当细菌黏附宿主细胞后，侵袭素与细胞上的整合素结合，使细菌 黏附部位的细胞膜沿细胞表面延伸隆起，细胞则陷入细胞膜的包围之 中，最终细胞膜完全包裹着细菌，完成侵入过程。侵袭素与宿主细胞 膜上的整合素结合后，激活细胞的酪氨酸激酶，从而引发一系列的级 联反应，导致细胞支架发生重排，肌动蛋白聚合成微丝，使细胞膜席 卷并包裹细菌。 补体受体 CR3 也是一种整合素，许多细菌侵入宿主的巨噬细胞时 就是通过结合在巨噬细胞表面的 CR3 受体上。细菌与 CR3 结合后，导 致吞噬细胞的吞噬作用 ，但不激活吞噬细胞的抗菌机制 ，细菌能在吞 噬细胞内生存 B 细菌内化入胞的机制 志贺氏菌在其