实验一邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件.docxVIP

实验一 邻二氮菲分光光度法测定微量铁的条件 一、实验目的 1、掌握分光光度计的原理、构造和使用方法。 2、学习分光光度计分析中如何确定最佳实验条件。 二、实验原理 在可见光区分光光度法测量中，通常是将被测物质与显色剂反应，使之生成有色物质，然后测其吸光度，进而求得被测物质的含量。显色反应的程度受显色剂用量、显色时间，显色液酸度等条件的影响，通过实验，确定合适的显色条件。 三、仪器及试剂 分光光度计；1cm 吸收池；10mL 移液管； 25mL 容量瓶,100ml 容量瓶 铁标准溶液 100μg·mL-1（即 0.01 mg·mL-1）铁标准溶液：准确称取0.3511g（NH ）  Fe（SO  ） ·6H O 4 2 4 2 2 于烧杯中，用 2 mol·L-l 盐酸 15 mL 溶解，移入 500 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀。用前，准确稀释 10 倍成为含铁 10 ug·mL-1 标准溶液。 1g.L-1 邻二氮菲：1.0 g 邻二氮菲于小烧杯中，加入5-10ml 95%乙醇溶液溶解，再用水稀释到 1000 mL。 10％盐酸羟胺水溶液：10％水溶液（现用现配，避光保存） 醋酸钠溶液 1mol/L 0.8 mol/L 氢氧化钠溶液 四、实验步骤 1、吸收曲线的制作和测量波长的选择 用移液管吸取 0.0ml、2.0mL 10 ug· mL-1 标准溶液，分别注入二个 25 mL 容量瓶中，加入 1.0mL10%的盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min；再加2 mL 邻二氮菲溶液，2.5mL 醋酸钠溶液溶液，用水稀释至刻度，摇匀。放置5min 后，用 1cm 比色皿，以试剂空白为参比，在440~560nm 之间，每隔 10nm 测一次吸光度，其中在 500-520 nm 之间，每隔 5nm 测一次吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度A 为纵坐标，绘制吸收曲线，找出最大吸收波长。 2、显色剂用量影响 在 7 只 25mL 容量瓶中，各加 2.0 mL10 ug·mL-1 铁标准溶液和 1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置 2 min。分别加入 0.1、0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 、4.0ml 1g.L-1 邻二氮菲溶液，再各加2.5mL 1mol/L 醋酸钠缓冲溶液，以水稀释至刻度，摇匀。放置5min 后，以水为参比，在 510 nm 测量各溶液的吸光度。 其中，加 2.0 mL 1g.L-1 邻二氮菲溶液的显色溶液不要倒掉，用于时间影响的测定。3、显示时间的影响 取上述 1 中加 2.0 mL 1g.L-1 邻二氮菲溶液的容量瓶，在显色时间为 10min、20min、30min、40min、50min、60min 分别测定吸光度值。 4、溶液酸度的影响 在 7 只 25mL 容量瓶中，各加入 2.0 mL 10 ug· mL-1 铁标准溶液和 1.0 mL 盐酸羟胺溶液，摇匀后放置 2 min，再各分 2.0ml 邻二氮菲溶液，摇匀。然后，分别用移液管准确吸取加人 0.8 mol·L-1氢氧化钠溶液 0.0、0.5、1.0，2.0，3.0，4.0、5.0ml 于容量瓶中，以水稀释至刻度，摇匀，放 置 10min。 用精密pH 试纸测定上述溶液pH 值，同时在分光光度计上，波长为510 nm，以水为参比测定各溶液的吸光度。 五、数据记录 1.最大吸收波长的确定 波长 波长 nm 440 450 460 470 480 490 500 505 510 515 520 530 540 550 560 吸光度 A 2、显色剂用量的影响 显色剂用量ml 吸光度A 0.1 0.25 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 3、显色时间的影响显色时间min 10 20 30 40 50 60 吸光度A 4、溶液酸度的影响 溶液 pH 吸光度A 六、结果讨论与思考 分别以波长、显色剂体积、显色时间、溶液pH 为横坐标、相应的吸光度为纵坐标，绘制曲线，确定最大吸收波长、合适的显色剂用量、显色时间、溶液pH 是多少？ 2．分光测定中比色皿盛放溶液的体积为多少，用手拿比色皿时应注意什么？ 实验二 邻二氮菲分光光度法测定微量铁的浓度 一、实验目的 掌握邻二氮菲分光光度法测定铁的方法 了解分光光度计的构造、性能及使用方法 二、实验原理 邻二氮菲（又称邻菲罗啉）是测定微量铁的较好试剂，在 pH=2～9 的条件 下，二价铁离子与试剂生成极稳定的橙红色配合物。配合物的 lg K 稳 尔吸光系数 ＝11000 L·mol-1·cm-1。 510 在显色前，用盐酸羟胺把三价铁离子还原为二价铁离子。 4Fe3+＋2NH2OH→4Fe2+ ＋ N2O ＋ 4H＋＋ H2O ＝21.3，摩 测定时，控制溶