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最新：人类卵母细胞与胚胎玻璃化冷冻中国专家共识 (2023年) 摘要 人类卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻是辅助生殖技术的重要组 成部分。由中国医师协会生殖医学专业委员会发起，参考最 新国际指南和共识，结合中国临床实践现状，经充分讨论后 形成该共识，旨在加强玻璃化冷冻技术质量控制，进一步改 善卵母细胞及胚胎冷冻结局，提升辅助生殖服务质量。 卵母细胞和胚胎玻璃化冷冻保存是人类辅助生殖技术 (assisted reproductive technology z ART )的重要 节。相较于 传统的程序化冷冻，玻璃化冷冻技术以其简单快速、不依赖 昂贵设备，且复苏率极高的显著优点，在国内外各大生殖医 学中心迅速普及推广，从而为人类生育力保存、胚胎植入前 遗传学检测以及全胚冷冻策略的广泛临床应用，提供了必要 的核心技术支持。卵母细胞及胚胎的冷冻复苏结局受诸多因 素影响， 包括冷冻保护剂种类、样本平衡时间、降温/升温速 率和冷冻载体类型等，造成各生殖中心间冷冻结局的差异。 有鉴于此，参考最新指南和共识〔 1-7],结合中国临床实践，由 中国医师协会生殖医学专业委员会发起，组织本领域专家对 人类卵母细胞与胚胎玻璃化冷冻技术流程和细节进行归纳 总结，以期提供一套全面系统的玻璃化冷冻操作规范指导意 见，提升生殖医学中心服务质量。 一人,员资质培训 初学者培训采用导师负责制，以经验丰富的胚胎学家作为指 导老师，由指导老师依据质控指标和经验判断初学者达到标 准后，方可进入下一阶段培训。整个培训过程形成书面记录 存档。 1、 理论学习 初学者应理解玻璃化冷冻的基本原理，掌握冷冻保护剂浓 度、操作温度、降温/升温速率等基本概念及控制方法⑻。 2、 动物样本 建议初学者在指导老师监督下使用动物样本进行为期1~2 个月的培训。以小鼠8-细胞胚胎为样本不断练习冷冻和解冻 操作，以熟练掌握试剂耗材的使用方法⑻。鉴于小鼠胚胎对 冷冻和解冻操作的敏感性低于人类胚胎⑼，建议对初学者的 要求设为操作50例小鼠8-细胞胚胎的复苏率不低于同中心 人类卵裂期胚胎(第3天)复苏率，且复苏后的小鼠8-细胞 胚胎需继续培养24~48 h ,其囊胚形成率应＞8O%no]e由于 鼠与人的种属差异，动物样本操作应在单独设置的培养室开 展,不宜在人类体外受精(in vitro fertilization , IVF )实验室进 行。 3、人类废弃卵母细胞或胚胎 使用常规废弃人类卵母细胞或胚胎进行培训，如不成熟卵母 细胞、多精受精卵母细胞、废弃的卵裂胚或囊胚（多精受精 卵母细胞来源），以熟悉人类卵母细胞或胚胎形态体积及冷 冻解冻操作。 4、临床实践操作 初学者通过使用动物样本和人类废弃样本熟练掌握技术，在 复苏率达到控制标准后，由指导老师带领初学者开展临床实 践操作，分配患者的小部分卵母细胞/胚胎交由初学者处理， 建议初始比例不超过20%。 试二剂. 与耗材的选择使用 1、玻璃化冷冻保护剂 主要 包括渗透性和非渗透性冷冻保护剂。前者具有较好的水 溶性和膜渗透性。高浓度渗透性冷冻保护剂所形成的高渗透 压 境可促使细胞快速脱水，同时渗透性冷冻保护剂能迅速 进入细胞内并置换水分子，这既能避免降温过程中大冰晶的 形成，又能确保在极低温度下细胞内呈玻璃化状态，最终实 现在液氮中长久保存。常用的渗透性冷冻保护剂有乙二醇、 丙二醇、丙三醇和二甲基亚砚等⑴】 。非渗透性冷冻保护剂不 能通过细胞膜，通过在细胞外形成适度的渗透压促使细胞进 一步脱水。非渗透性冷冻保护剂的使用既减少了渗透性冷冻 保护剂使用浓度，又缩短了细胞在冷冻保护剂中的暴露时 间。在解冻过程中，非渗透性冷冻保护剂可以防止细胞过度 膨胀而 崩解。常用的非渗透性冷冻保护剂有蔗糖和海藻糖 [12] O 玻璃化冷冻试剂套装一般 包括基础液、平衡液和冷冻液。基 础液通常含有人血清白蛋白和p 缓冲体系，如4-羟乙基哌 嗪 乙磺酸(4-(2-hydroxyethyl)-1 -piperazineethanesulfonic acid, EPES )和 3-吗琳丙磺酸(3-(N-morpholino)-propanesulphonic acid z MOPS );平衡液是在基础液中添加渗透性冷冻保护剂 制成；冷冻液是在基础液中添加更高浓度的渗透性和非渗透 性冷冻保护剂制成。解冻试剂套装通常 包括解冻液、稀释液 和基础液