基因功能分析的基本策略.pptVIP

逆转录病毒感染法 外源基因 逆转录病毒载体 逆转录病毒感染 四/八细胞胚胎/囊胚/原肠胚 嵌合小鼠 纯合体小鼠 当前第30页\共有71页\编于星期四\21点 逆转录病毒感染法的特点 通过病毒 DNA 插入宿主 DNA 的机制，将外源目的基因整合到宿主基因组，整合效率高。 反转录病毒载体容量有限，只能转移小片段DNA(＜10kb)。 对家禽类的转基因研究有重要意义。 当前第31页\共有71页\编于星期四\21点 4）精子载体法 外源 DNA 精子 卵细胞 受精卵 转基因动物 共育法 脂质体转染法 电穿孔法 当前第32页\共有71页\编于星期四\21点 DNA 精子 受精卵 DNA 卵细胞 DNA 胚胎干细胞 DNA 逆转录病毒感染 磷酸钙-DNA共沉淀法 逆转录病毒感染法 电穿孔法 四细胞胚胎 囊胚 原肠胚 转基因动物 微注射 显微注射 当前第33页\共有71页\编于星期四\21点 3. 下游—基因整合与表达检测及筛选 染色体基因水平：是否整合了外源基因以及整合的位点和拷贝数。 转录水平：转基因的 mRNA 的存在与否以及表达水平。 蛋白水平：转基因的蛋白质的表达以及功能检测。 当前第34页\共有71页\编于星期四\21点 鉴定方法 PCR Southern blot 染色体原位杂交 Nort