双酚A对大鼠睾丸紧密连接蛋白Occludin的体外影响的中期报告.docx

双酚A对大鼠睾丸紧密连接蛋白Occludin的体外影响的中期报告 在本次中期报告中，我们研究了双酚A对大鼠睾丸紧密连接蛋白Occludin的体外影响。本次实验共分为以下几个阶段： 阶段一：细胞培养 我们使用了一株大鼠睾丸间质细胞系，将其种植在培养皿中进行培养。采用的培养基为DMEM/F12，在其中加入10%的胎牛血清、1%的L-谷氨酰胺和1%的抗生素，pH值为7.4。在37℃、5% CO2的条件下培养细胞，并更换培养基，以保证细胞健康生长。 阶段二：处理双酚A 在细胞生长至80%左右时，我们加入双酚A进行处理。处理浓度分别为0、1、10、100、1000 ng/ml，处理时间为24小时。使用的双酚A为化学纯级别，采用甲醇进行溶解。 阶段三：提取蛋白 在处理完成后，我们使用RIPA lysis buffer提取蛋白，并利用BCA法对蛋白浓度进行测定。 阶段四：Western blot分析 我们使用SDS对提取的蛋白进行分离，然后转移至PVDF膜上。使用抗Occludin和抗β-actin的一抗进行孵育，再用HRP标记二抗进行检测。 阶段五：数据分析 使用ImageJ软件对Western blot结果进行定量分析，并使用SPSS软件进行统计学分析。 目前，我们已完成实验前三个阶段，提取了5组不同双酚A浓度的蛋白样品，并使用Western blot检测了Occludin表达水平。初步分析结果显示，随着双酚A浓度的增加，Occludin表达量呈现下降趋势，具体数据见下表。 双酚A浓度（ng/ml） Occludin相对表达量 0 1.00 1 0.88 10 0.71 100 0.57 1000 0.41 接下来，我们将继续完成实验后两个阶段，并对数据进行深入分析，以全面了解双酚A对Occludin表达水平的影响。