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β-hCG单克隆抗体的集成分离纯化的中期报告
β-hCG是一种广泛存在于人类和动物体内的卵黄素类激素,主要由胚胎及其后续发育阶段的滋养层细胞合成。在临床应用中,β-hCG可以作为一种早期孕酮的指标,在判断妊娠状态、诊断实体瘤和其他相关领域具有重要作用。因此,对β-hCG的敏感性和特异性检测技术的研究一直是临床医学领域的热点之一。
本文旨在开发β-hCG单克隆抗体并对其进行集成分离纯化。首先我们利用纯化深广培养的生产β-hCG的人绒毛膜成纤维细胞(HCMFs)细胞分泌的β-hCG卵黄素,选取注册为β-hCG抗体的小鼠动物免疫的方法来制备β-hCG单抗。经过免疫和单克隆化筛选,我们收到了两株单克隆抗体(P7和P10)。
P7和P10单克隆抗体的纯化方法如下:先利用酒精分配(C.A.C)法尽可能地去除可能会影响纯化的杂质;然后使用酸碱洗脱平台进行洗脱;利用pH、流速和盐浓度等因素进行渐变洗脱。通过SDS和Western blot技术,我们确定了β-hCG单克隆抗体的纯度和敏感性。最终,我们将选择的P7和P10单克隆抗体与马铃薯病毒Y(HIPV)载体端融合表达结构域,用于β-hCG单克隆抗体的高效表达。
目前,我们已经成功地制备了β-hCG单克隆抗体,并确定了其适当的纯化方法,今后将进一步探索抗体的应用领域,并对其进行改进以提高其性能和稳定性。
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