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二氢杨梅素的稳定性研究 腾茶又名红葡萄属植物，是一种又名“汉d-maoya”的野生藤本植物。它是属于葡萄科的一种野生藤本植物。它是所有植物的一种。它尝起来又甜又淡，很新鲜。具有清热解毒、散风除湿、强筋骨骼等功效。自古以来,壮族和瑶族人民将其幼嫩茎叶经过杀青、揉捻、烘干保健茶,具有营养丰富、回味甘甜、清热解毒、生津止渴、润喉散痰等特点,用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疮疖等症,夏天泡茶数日不馊,有“神茶”之称。化学研究表明,藤茶是一种富含黄酮类化合物的罕见植物,有效部位黄酮总量达30%左右,其中主要成分为二氢杨梅素(Dihydromyricetin,简称DMY)。药理研究表明,DMY能对抗去肾上腺素和高K+所致的兔胸主动脉条的收缩反应及显著扩血管和钙阻滞作用,具有消炎、抑菌、止咳、镇痛、消脂及抗脂质过氧化等功效。因此,DMY具有广泛的应用前景。由于DMY的结构中具有六个羟基,结构不稳定,其自身往往易氧化成低活性甚至没有活性的氧化产物,特别是在天然植物原料加工过程中,发生自动氧化对其活性损失很大,因此了解影响其自动氧化的因素,对保证DMY活性具有重要的理论意义和实际指导意义。 仪器与试药 BF-KNAUER高效液相色谱仪(K501高压输液泵,K2501紫外分光检测器,BF2002色谱工作站,北京北分瑞利分析仪器(集团)有限责任公司);Scout百分之一电子天平(梅特勒-托利多常州衡器有限公司);FA2104万分之一电子天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂);METTLER TOLEDO 320SpH计(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。二氢杨梅素(DMY)对照品为从湖南江华产藤茶中分离得到,经UV,IR,MS,1H-NMR光谱分析鉴定结构,归一化方法检测,含量在99.0%以上;所用化学试剂均为国产分析纯。 方法与结果 1 流动相、脱气曲线 色谱柱:江苏汉邦公司Lichrospher C18柱(150mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.1),应用前经过0.45μm微孔滤膜抽滤,超声脱气;流速:1.0mL·min-1;进样量:20μL;柱温:25℃;检测波长:290nm。 2 酶活剂 精密称取0.05g的DMY对照品置50mL量瓶中,加入50%的乙醇定容至刻度,配成1mg·mL-1的照品贮备溶液。精密吸取该对照品贮备溶液0.1,0.2,0.4,0.8,1.2,1.6mL置25mL量瓶中,加甲醇至刻度摇匀,配制成4.0,8.0,16.0,32.0,48.0,64.0μg·mL-1系列浓度溶液。在上述色谱条件下,进样20μL,以DMY的峰面积(A)对DMY的浓度(C,μg·mL-1)进行线回归处理,得方程:A=6.59×104C+3.64×103,r=0.9993,线性范围为4.0~64.0μg·mL-1。 3 复进样峰面积rsd 精密吸取同一浓度的DMY对照品溶液20μL, 重复进样5次,峰面积的RSD 为1.2%。精密吸取同一批样品溶液20μL,每隔1h测1次,连续测5次,RSD为1.6%。表明本试验重复性及稳定性均良好。 4 影响dmy溶液稳定性的研究 4.1 dmy在不同ph值的缓冲溶液中的降解 用Tris-HCl及Tris-NaOH配制成pH值为3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,12.0的缓冲溶液。精密量取11份 5mL的1mg·mL-1DMY溶液分别置于50mL量瓶中,除其中1份用蒸馏水定容至刻度外,剩余10份分别加入不同pH值的缓冲溶液至刻度,摇匀配制成DMY含量为0.1mg·mL-1的系列溶液,在37℃水浴中自然散射光下密封放置,测定DMY在不同pH下的紫外吸收光谱,结果见图1。同时pH 3.0~8.0的缓冲溶液配置的样品于0,3,5,7,14,21,28d定期取样1mL,真空冻干,以HPLC流动相定容1mL,HPLC法测定在不同pH值下DMY的保存量。以浓度的对数对时间作图,结果见图2。 从图1看出,在pH≤8条件下的DMY水溶液的最大吸收峰均在290nm,在pH 9.0~12.0下290nm特征峰消失,而在325nm处出现最大吸收峰。此结果说明,pH≥9.0时DMY因处于碱性环境而发生自动氧化作用,生成了其他成分。图2表明,DMY在不同pH值条件下降解属一级动力学反应。按动力学一级反应的数学模型,计算不同pH值下的DMY降解的动力学方程及降解速度常数及半衰期见表1。由该表可见,pH≤5时DMY较稳定。 4.2 动力学反应模型 取DMY含量为0.1mg·mL-1的pH值为4.0的缓冲溶液各6份,分别在4℃,37℃,45℃,65℃,85℃保温处理并定期取样1mL,真空冻干,以HPLC流动相定容1mL,HPLC法测定DMY的保存量,以