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AKTA 蛋白纯化系统操作 AKTA 蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA 系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER 为例简单介绍 AKTA 蛋白纯化系统的一般操作。 1、认识AKTA。 AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。它们是： FIG 1、AKTA EXPLORER 主机 Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。在AKTAexplorer 100，流速范围 ml/min，压 力高达 10 Mpa（泵名为P-901）。在 AKTA explore10，流速范围 ml/min，压力高达 25 Mpa （泵名为P-903）。 Monitor UV-900，同时监控 190－700 nm 范围内高达 3 个波长的多波长紫外-可见 （UV-Vis）监测器。（针对部分 AKTA PURIFIER 机型，尚有UPC-900 监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。） Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。 Fig 2、AKTA EXPLORER 硬件模式图 ！ AKTA EXPLORER 系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。打开装阀的门可全部看到。柱被挂在装阀的门的外侧。 分离装置由 UNICORN 软件控制。软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950 进行控制。 2、一般操作 开机 按位于底部平台前左侧的 ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。待仪器自检完毕（CU950 上面的 3 个指示灯完全点亮并不闪烁）。双击桌面上 UNICORN 图标， 进入操作界面。UNICORN 的操作界面分为四个窗口（Fig 3） Fig 3、Unicorn 的操作界面 2.2 准备工作溶液和样品 所有的工作溶液和样品必须经过 m 的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。 2.3 2.4 … 清洗及管道准备 首先将 A 泵的进液管道（A1）放入缓冲液或平衡液中，将B 泵的进液管道(B1)放入 高盐溶液中，在 system control 窗口点击工具栏内的 manual，选择 pump→pump wash explorer，选中A1,B1 管道为ON， execute。泵清洗将自动结束。(Fig 4) Fig 4、AKTA Explorer 的泵清洗操作 安装层析柱 在 manual 里选择 pump→flow rate，输入一定的低流速（Fig 5），insert；选择 Alarmmon→alarm pressure，设置 high alarm（输入填料或层析柱的耐受压力，以较低者为设置值，具体可在填料说明书或层析柱说明书中查到），insert，execute（Fig 6）。待 InjectionValve 的 1 号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。 Fig 5、AKTA Explorer 的流速设定操作 Fig 6、AKTA Explorer 的限压设定操作 2.5 2.6  ~ 开始纯化： 在柱子平衡好之后（电导，pH 的数值和变化趋势稳定）即开始上样了。此时应 将紫外调零（Fig 7），选择 Alarmmon→autozero，exectue。 Fig 7、AKTA Explorer 的紫外调零操作2）具体上样方式：AKTA 系统的上样方式比较灵活，可以根据具体样品的条件进行 上样，包括用样品环上样、用系统泵上样、用样品泵上样等，这里以用系统泵上样为例简单介绍上样过程。点击pause，将A1 放入样品中，点击countine，待样品上完后，再 将 A1 放入到平衡液中继续清洗柱子。 洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在 manual 里选择pump→gradient，按照自己的工艺选择targetB（100％）和length（10CV）（Fig 8）。 Fig 8、AKTA Explorer 的洗脱条件设定操作 设定收集：选择 Frac→fractionation_900,输入每管收集体积，exectue（Fig 9）。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop_900，exec