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API 含量测定方法验证方案 CCC 制药有限公司 验证方案起草、审核、批准表 起草部门 起草部门 起草人 职称 职务 日期 质检部 审核部门 审核部门 审核人 职称 职务 日期 质保部 批准人 批准人 签名 日期 质量副总经理 计划验证时间 2008年9月 验证小组人员名单 组长 组长 姓名 部门 职务 目 录 1、概述… 5 2、试验所需仪器… 5 3、试剂和样品… 5 4、色谱条件… 5 5、溶液配制… 5 6、专属性试验… 6 7、溶液稳定性试验… 6 8、线性试验… 7 9、回收试验… 7 10、精密度试验… 8 11、检出限和定量限… 9 12、含量测定方法评价… 10 1、概述 通过对API 含量测定方法的验证，得到可信赖的和准确的数据，用于药品的含量测定， 从而验证该方法的可行性。 2、试验所需仪器 分析天平（灵敏度为 0.01mg ）型号 编号 有效期液相色谱仪 型号 编号 有效期 3、试剂和样品 乙腈 HPLC 级 API 标准品 USP 标 准 品 API 有关物质 A USP 标准品有关物质 B USP 标准品 有关物质 C USP 标准品 4、色谱条件 色谱柱： 4.6mm×10cm C8 柱，其填料粒径为 3.5 微米检测波长：254nm 流速：1.0 ml/min 进样量：20μl 柱温：40℃ 流动相：A 溶液和 B 溶液不同比例的混合溶液。（见下表） 其中， 时间（分钟） 稀释液——水：乙腈（60：40） A 溶液——水：乙腈（70：30） B 溶液——水：乙腈（50：50） A 溶液 B 溶液 洗脱方式 0-6.5 100→50 0→50 线性梯度 6.5-10 50→0 50→100 线性梯度 10-20 0 100 衡梯度 20-20.1 0→100 100→0 线性梯度 20.1-28 100 0 衡梯度 5、溶液配制 系统适应性溶液：取 API 标准品和 API 相关物质 A 和相关物质 B 标准品，精密称定， 用稀释液配制成 0.05mg/ml 的溶液。 标准溶液：取适量 API 标准品，用乙腈溶解，超声处理，得到 1.0mg/ml 的溶液。 取4ml 该溶液置于 10ml 容量瓶中，用水稀释至刻度。用稀释液进一步稀释，即得浓度为0.04mg/ml 的溶液。 供试溶液：取本品约 20mg，置于 50ml 容量瓶中，精密称定，用 20ml 乙腈溶解（可以超声处理），然后用水稀释至刻度。吸取 1ml 此种溶液置于 10ml 容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得。 6、专属性试验 取系统适应性溶液注入色谱系统，记谱色谱图，API 相关物质 B（离 API 峰最近的杂质峰）与 API 峰的分离度应不小于 1.5，各杂质峰分离良好，同时取稀释液作空白溶液，注入色谱系统，记谱色谱图，在 API 出峰处无干扰峰出现。同时与 API 降解试验结果对比，各 降解产物峰在API 峰处无干扰，不影响API 测定。 7、溶液稳定性试验 取本品约 20mg，置于 50ml 容量瓶中，精密称定，用20ml 乙腈溶解（可以超声处理），然后用水稀释至刻度。吸取1ml 此种溶液置于 10ml 容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得制成供试品溶液。取供试品溶液分别于0 小时，2 小时，4 小时，6 小时，8 小时注入色谱系统，记谱色谱图，记录API 峰面积，8 小时内API 峰面积的相对标准偏差（RSD%）不大于 2.0%。 时间(h) 时间(h) 0 2 4 6 8 RSD（%） API峰面积 8、线性试验 200%标准贮备溶液：取 API 标准品 20mg，精密称定，置 50ml 容量瓶中，用 20ml 乙腈溶解（可以超声处理），然后用水稀释至刻度。精密吸取10ml 此种溶液置于 50ml 容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，混匀即得浓度为0.08mg/ml 的 200%的标准贮备溶液。 160%标准溶液：精密移取 8.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 120%标准溶液：精密移取 6.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 100%标准溶液：精密移取 5.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 80%标准溶液：精密移取4.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 40%标准溶液：精密移取2.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 20%标准溶液：精密移取1.0ml 的 200%标准储备溶液置 10ml 容量瓶中，加稀释液稀释至刻度，混匀即得。 分别取上述线性供试品溶液注入