碳青霉烯类抗生素的电喷雾质谱裂解规律分析.pdfVIP

碳青霉烯类抗生素的电喷雾质谱裂解规律分析 碳青霉烯类抗生素 (Carbapenemantibiotics)对革兰阳性菌、革兰阴性菌以及厌 氧菌等均有良好的抗菌活性，具有抗菌谱广、抗菌活性强、对-内酰胺酶高度稳 定的特点。临床上广泛用于各种严重细菌感染性疾病的治疗，尤其是混合型细菌 感染和耐药菌感染，是目前最重要的一类抗感染药物。 电喷雾质谱(ESI-MS)作为一种软电离技术，既可测定化合物的相对分子质 量，又能获得较为丰富的结构信息，在医药领域的应用较为广泛，尤其适用于研 究化合物在 MS 中的裂解规律。碳青霉烯类化合物的结构含有多个伯胺或仲胺基 团，在MS 正离子检测模式下具有较强的离子响应。目前仅有对美罗培南裂解行 为的 MS 分析，未见对碳青霉烯类抗生素 MS 裂解规律的系统总结。因此本试验 对 4 种母核相同、结构相似的碳青霉烯类抗生素(亚胺培南、美罗培南、比阿培 南、帕尼培南)进行 ESI-MSn 分析，并对相关特征离子进行了深入研究，归纳总 结其 MS 裂解规律，旨在为其他碳青霉烯类化合物及其代谢物、衍生物的结构解 析和定量分析提供科学依据。 1 材料 1.1 仪器 Acquity 超高效液相色谱 (UPLC)仪、Quattro Premier XE 三重四级杆 MS 仪、 电喷雾离子化源(ESI)及 Masslynx4.1 数据处理系统 (美国 Waters 公 司);Milli-Q Advantage A10 超纯水 机 (美国 Millipore 公司)。 1.2 药品与试剂 亚胺培南对照品 (美国默沙东公司，纯度：95%);美罗培南对照品 (批号： 130506-202202，纯度：98%)、比阿培南对照品(批号：130578-202201，纯度： 95%)均来源于中国食品药品检定研究院;帕尼培南对照品(日本第一三共制药公 司，纯度：95%);甲酸、乙腈均为色谱纯，水为超纯水。 2 方法 2.1 MS 条件 1 / 3 正负离子检测模式的 ESI 电离;毛细管电压：3.0 kV;锥孔电压：25 V;离子 源温度：350 ℃;脱溶剂气 (N2)流速：600 L/h;锥孔反吹气流速：30 L/h;采用全 扫描及子离子扫描方式;扫描范围质荷比(m/z)50～800;碰撞能量 15～30 eV。此 外，三级 MS(MS/MS/MS)的采集是通过调节源内碰撞诱导解离在 20～40 V 范围内， 全扫描方式下观察子离子裂解丰度，之后选择响应稳定的子离子进行 MS/M 分 析，采用子离子扫描方式，从而获取准 MS/MS/M 谱。 2.2 分析方法 待测物的 ESI-MSn 分析方法：分别用去离子水将 4 种碳青霉烯类抗生素制备 成质量浓度为 10 g/ml 的溶液。各取上述溶液 250 l，蠕动泵分别进样，流速为 10 l/min。经由三通与UPLC 仪 (进样器)相连，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液 (20 ∶80)，流速为 0.2 ml/min。 3 结果与分析 正离子检测模式下，将 4 种抗生素分别经过 M 谱扫描，发现该类碳青霉烯 类抗生素多以[M+H]+准分子离子峰存在，分别为 m/z 300(亚胺培南)、m/z 384(美 罗培南)、m/z 340(帕尼培南)、m/z 351(比阿培南)。为了明确该类抗生素的M 裂解方式，探讨其 M 裂解规律与结构的相关性，分别对上述抗生素的[M+H]+离 子进行 MS/M 谱测定，获得了相应子离子及相对丰度。 此类环裂解反响较为典型，除亚胺培南、帕尼培南与比阿培南等碳青霉烯类 抗生素均会发生该反响外，具有噻唑环的青霉烯类抗生素也会发生相同的环裂解 反响;此外，离子 m/z 298 的准 MS/MS/M 谱会产生子离子 m/z 254，二者相差 44 Da，推测为离子m/z 298发生分子内重排丧失 1分子CO2 所致;经过准MS/MS/M 谱分析发现，离子 m/z 200 是由离子 m/z340 产生，推测为后者首先发生脱羧反 响，之后发生碳-硫键的裂解反响而产生的 ;同时，碳-硫键的裂解反响还可形成 离子 m/z 173;丰度最高的离子 m/z 141 是由正电荷引发的诱导裂解反响导致碳 -硫键发生断裂而产生的。除亚胺培南外，其余抗生素的 MS/M 谱均显示离子 H 相对丰度较高;该离子的准 MS/MS/