多穗柯不同部位三叶苷含量测定及抗氧化活性分析.docxVIP

PAGE 4 　　在我国，民间利用多穗柯的历史悠久，主要以其叶做茶饮。现代研究表明，多穗柯中的主要活性成分是根皮苷与三叶苷，属于二氢查尔酮类成分。其中三叶苷为浅黄色结晶性粉末，无吸湿性，易溶于热水、乙醇，微溶于冷水 。现代医学研究表明，多穗柯中的三叶苷、根皮苷，其具有广泛的医学用途。可以抑菌消炎[3];还具备抗氧化作用，是天然的抗氧化剂;可以降低血糖血脂[4]；三叶苷可以抑制糖尿病关键酶（α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶），有效治疗糖尿病[5]；还能抗癌防癌[6]。多穗柯是兼有茶、糖、药三种功能的珍贵植物，利用范围很广、研究价值极高。 　　近年来，对多穗柯研究比较热门的领域有: 活性成分测定与提取、有效成分作用、根皮苷、三叶苷等黄酮类物质研究。利用超声波、微波、改性树脂、大孔树脂纯化等技术进行纯化提取。多穗柯作为一种常绿乔木，其树高通常可达到近20米，但是对于多穗柯活性成分的提取与利用，主要集中于多穗柯的叶部位，对于多穗柯的根、茎、、树皮、果实等部位，对其活性成分，尤其是三叶苷的含量测定研究很少，少见文献报道。这造成多穗柯部分生物资源的浪费以及多穗柯整体利用率较低。通过测定多穗柯不同部位的三叶苷含量，并以叶部位的三叶苷含量作为标准，比对其中的含量差异，对于三叶苷含量较高的部位，可以进行三叶苷的提取;对于三叶苷含量较低的部位，可探究其在其它方面的利用价值。 　　对多穗柯三叶苷的提取，可以使用热水提取法，也称为煎煮法，该方法不涉及有机溶剂，可以在植物脱水前进行。水蒸馏包括三种主要的物理化学过程：水的扩散、水解和分解。在高提取温度下，一些挥发性成分可能会丢失，也可能导致热不稳定化合物的降解，有效成分被破坏，这个缺点限制了它对不稳定化合物的提取。因此该方法仅适用于苷类化合物的提取。但是该方法没有危险的化学合成，而且设计节能，减少了衍生品的食使用，防止降解，防止污染，防止事故发生。最重要的是减少了合成有机化学物质的使用，减少了操作时间，提高了提取率和质 量，而且提高了从植物材料中提取生物活性成分的总体产量，正在越来越多的被使用到科研和生产当中去[10- 13]。 在生物系统中，活性氧（ROS）和活性氮（RNS）（如超氧化物，羟基和一氧化氮自由 　　基）会导致细胞中脂质和蛋白质的氧化，损害它们的正常功能。并且由于现代人的一些不良生活习惯比如吸烟、饮酒、辐射或环境毒素会导致过量的 ROS 和 RNS 的产生，从而破坏机体内氧化和抗氧化之间的平衡，导致许多疾病的产生。但是抗氧化剂可以有效防范和治疗这些疾病，许多植物的活性成分被认为具有巨大的抗氧化潜力，如黄酮等[7-9]。黄酮特定的化学结构使它们能够通过多种机制降低氧化应激。三叶苷作为一种提取自多穗柯的黄酮类物质，测定、分析其抗氧化活性，对于促进其在功能性食品，药品和食品添加剂中的应用有着至关重要的作用。 材料与方法 试验材料 　　多穗柯样品2021年1月采自于福建省德化县葛坑镇，该地区海拔600-850m，土壤湿度为3.9%-4.6%，土壤温度为 15.1℃-20.1℃，气候条件非常适于多穗柯的生长发育，采集该地区野生多穗柯的根、茎、叶、树皮、果实这5个主要部位，冷藏备用。 试验仪器 　　电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司）、HH-8数显恒温水浴锅（常州天瑞仪器有限公司）、微量分析型超纯水机（四川沃特尔水处理设备有限公司）、KQ-300DE超声波仪器（昆山市超声仪器有限公司）、酶标分析仪（南京德铁实验设备有限公司）、紫外分光光度计（上海谱元仪器有限公司）、旋转蒸发仪（常州市瑞德仪器有限公司）、分液漏斗、烘箱、过筛器、容量瓶、锥形瓶、试管、移液枪。 2.3试验试剂三叶苷标准品、甲醇、氯仿、75%乙醇、无水乙醇、维生素C、DPPH，以上试剂均为分析纯。 2.4试验方法 2.4.1样品的制备 　　将所采集的野生多穗柯的不同部位的原材料在105℃下进行30min杀青，之后放入80℃烘箱烘干,再用粉碎机粉碎,最后经过筛后得到样品，备用。 　　分别称取5g不同部位的多穗柯样品，料液比为1:8加入超纯水配置溶液，在超声功率为720W，80℃的温度下加热 60分钟后过滤，即得到多穗柯不同部位三叶苷粗提物。 2.4.2最大吸收波长的确定 　　准确称取三叶苷标准品 10 mg，用10mg三叶苷标准品溶解于25ml纯水，然后取其12ml用纯水定容至25ml得到溶液，静置15 min后，取该溶液 2mL ，在 200 ～ 700 nm波长范围内扫描，确定其最大吸收波长为 285nm。 2.4.3三叶苷标准曲线的绘制 　　取10mg三叶苷标准品溶解于25ml甲醇，然后取其12ml用甲醇定容至25ml得到溶液，再分别取1、2、3、4、5ml溶液分别用纯水定容至10ml。在285nm波长下测定吸光值。 以吸光度为横