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SRDP 实验报告范文 一、 实验目的 测定酸模、香蒲、毛茛、青岛藨草、绿萝5 种湿地植物在污水净化过程中根内酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和脲酶活力。 二、实验方法 磷酸酶测定方法 (1)根中酸性磷酸酶的测定;(2)根中碱性磷酸酶;(3)水中酸性磷酸酶; (4)水中碱性磷酸酶。 脲酶测定方法 (1)(1)1)根中脲酶活性：奈氏试剂显色法;(2)水中脲酶活性：同根中脲酶活性测定方法，但酶液是直接取 0.5 mL 的污水。 三、 实验材料及试剂 实验材料 实验室条件下用自制污水培养的 5 种湿地植物(自移植至实验室新生出的根系要达到一定量); 实验中使用的污水是自配污水，配方如下：水 1L、淀粉 0.067g、葡萄糖 0.05g、蛋白胨 0.033g 、牛肉膏 0.017g 、Na2CO3 · 10H2O( 无水 0.02g)0.067g 、 NaHCO30.02g、Na3PO40.017g、尿素 0.022g、(NH4)2SO4 0.028g; 实验试剂 磷酸酶、脲酶测定过程中需要试剂： ①0.2mol /L pH7.8 磷酸缓冲液 ②0.2mol·L - 1 pH 5.8 醋酸钠缓冲液 称取醋酸钠 16.406g，容量瓶定容至 1L，用 0.3 mol/L 的醋酸溶液调节 pH =5.8(用 pH 计校正)。 ③3N NaOH 溶液 ④0.05mol·L - 1 pH 8.7Tris–盐酸缓冲液缓冲液 称取12.114 克Tris，容量瓶定容至1L，取50 毫升0.1M 三羟甲基氨基甲烷(Tris) 溶液与 10.3 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100 毫升，再用 pH 计校正。 ⑤奈氏试剂：称取 7g 碘化钾溶于 10 ml 水中，将 10g 碘化汞溶于其中。在100ml 容量瓶中配置氢氧化钾溶液，称取 24.4g 加入含有 70 ml 水的容量瓶中， 放置冷却。把配好的碘化钾和碘化汞溶液缓缓加入容量瓶，加入的同时要慢慢摇动，加水稀释至刻度，然后摇匀。将溶液盛放在棕色玻璃瓶中置暗处保存两天后再使用。 ⑥10%三氯乙酸 ⑦10%酒石酸钾钠 实验仪器 高温消解器、紫外分光光度计、离心机、恒温水浴锅、pH 计、研钵、高压灭菌锅、50mL 具塞(磨口)刻度管。 四、 实验过程 系统设置 取 30 个 1L 容量的大烧杯，洗净。将生长态势比较一致的 5 种植物从清水中 取出，植物根部用 15%的双氧水灭菌处理 10 分钟后，用蒸馏水清洗干净，按照每组湿地植物湿重相等的原则，放入大烧杯。将烧杯分成 5 组，分别栽种香蒲、绿萝、青岛藨草、酸模、毛茛，每一组由两小组组成，栽种香蒲的两小组编号为X 和 X0，栽种绿萝的两小组编号为 L 和 L0，栽种青岛藨草的两小组编号为 Q 和Q0，栽种酸模的两小组编号为 S 和 S0，栽种毛茛的两小组编号为 M 和 M0，每组中前者中加入 250ml 自配污水，后者作为对照加入等量的自来水。 测定方法 磷酸酶测定方法 根中酸性磷酸酶： 酶液提取：称取植物根系材料 0.1g，放入研钵，再向其中加入 1ml 磷酸缓冲液(PH7.8)，小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在 0℃下 1200r/min 转速的条件下，离心 30min，上清液为待测液，取 0.5 ml。 具体方法：取配置好的 pH 为 5.8 的 0.2mol·L - 1 醋酸钠缓冲液 70ml ，以之为溶剂配成浓度为 0.15g·L - 1 对硝基苯磷酸二钠(pNPP) 酶反应液，加入 0.5 ml酶液后将其用黑纸包裹，置于 25 ℃下培养 1 小时。向其中加入 1ml3N NaOH 溶液，以终止酶促反应，使用α-1860S 紫外可见分光光度计在 405nm 波长处进行比色测定。在单位时间内单位重量鲜根水解pNPP 生成的pNP 量来表示酶活性(μ g·h - 1·g - 1 鲜根)。 根中碱性磷酸酶：测定方法与酸性磷酸酶的类似，唯一的区别是酶反应液是由 Tris-HCl 缓冲液(pH = 8.7) 配制的。 水中酸性磷酸酶：取 0.5 ml 污水作为水中酸性磷酸酶的酶液。具体方法同根中酸性磷酸酶。 水中碱性磷酸酶：取 0.5 ml 污水作为水中碱性磷酸酶的酶液。具体方法同根中碱性磷酸酶。 脲酶测定方法 根中脲酶活性：奈氏试剂显色法。 酶液提取：称取植物根系材料 0.1g，放入研钵，再向其中加入 1ml 磷酸缓冲液(PH7)，小心研磨至匀浆，再将其全部吸入离心管中，在0℃下 1200r/min 转速的条件下，离心 30min，上清液为待测液，取 0.5 ml。 具体方法：取适量的干净试管，并给试管编号，依次向其中加入 2 mL 0.3 mol/L 尿素-0.05 mol/L 磷酸盐缓冲溶液(pH 7)，然后将试管放入 37 ℃恒温