大肠杆菌培养基的优化及发酵罐操作完整PPT.pptVIP

大肠杆菌培养基的优化及发酵罐操作;目录;大肠杆菌;;; 大肠杆菌高密度培养最关键的问题是代谢副产物乙酸积累所引起的抑制和毒害作用。 预防措施： 1、通过控制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高，乙酸产生越多，当比生长速率超过某个值时，乙酸开始产生。可以通过降低温度，调节酸碱度，控制补料等方法来降低比生长速率。 2、透析培养：在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质，降低乙酸含量从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。 3、控制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中重要的碳源之一，用其作碳源是要将其控制在一个较低的水平上，以减少乙酸的产生。;培养基选择;培养基配制;培养方式;培养条件;2、上罐前一天，由斜面菌种转接一级种子 将全部发酵液取出后，100℃煮沸10分钟灭菌，灭完菌的发酵液可排放入下水道。 以0D值为纵坐标，菌液浓度（g/L）为横坐标，绘制标准曲线。 （5）定时取样测定发酵液中氨基氮的含量，测定步骤如下： 例如,预先设定pH恒定值,发酵中菌体代谢产生酸性物质或铵,使pH值发生改变,从而启动控制开关,开始补料,pH恢复至恒定值以溶解氧浓度作为补料开关则是根据培养基中某种关键营养物(主要是碳源)消耗,会导致溶解氧浓度迅速改变。 1、温度：36~38 ℃ 以0D值为纵坐标，菌液浓度（g/L）为横坐标，绘制标准曲线。 控制的几个关键参数如下： 大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。 大肠杆菌高密度培养时最关键的问题是如何尽量减少乙酸的产生，因为高浓度葡萄糖或高比生长速率带来的高浓度乙酸会严重抑制细胞生长和重组蛋白的生产。 5 ％溴麝香草酚兰液 2滴和 0. 0 ml，混匀，加 0. 3、葡萄糖的流加：根据发酵的实际经验，流加补料分三个阶段进行，发酵过程中0~4h不加补料，4~10h补加含50g葡萄糖的补料，10~20h加入含190g葡萄糖的补料，诱导前0. 配制种子固体培养基100mL ， 分装试管， 0. 种子瓶， 37℃振荡培养10h。 ①取发酵液经3500 r／min离心 10min。 发酵过程中各生化指标的测定 1MPa 灭菌20min，然后摆成斜面。;菌种准备;微生物的培养方式主要有分批、连续和补料分批3种。 高密度发酵对发酵设备有较高的要求,而且对发酵条件也有非常高的要求。 上罐前的准备及实罐灭菌 大肠杆菌发酵大多采用补料分批培养，这是在现代发酵工艺得到优化的一种方式，能有效的优化微生物培养过程中的化学环境。 放罐完毕后，打开自来水进水口，往发酵罐中注满水，同时开动搅拌轴搅动清洗五分钟，排水。 0L，置发酵罐内，加入几滴泡敌。 5 ％溴麝香草酚兰液 2滴和 0. 6、当温度降到100℃以下，缓缓开排气阀V4，使保护罩顶压力表指示为零，移去保护罩。 5、当保护罩顶部阀门V4有蒸气排出时，2min后关闭阀门，当罐温接近灭菌温度时，微开阀V4适当排气，并调整蒸气阀S1维持罐温。 当发酵罐内温度达到并维持在所需温度后，进行如下操作：1、取样：松开弹簧夹J2，用无菌空气将取样管残液压入发酵罐内，再夹紧J2，将出料管放入接料瓶，松开取样管弹簧夹J3，发酵液被压入接料瓶，开J2、J3排出取样管内残料，夹紧J2、J3 种子瓶， 37℃振荡培养10h。 0 ml于两个磨口具塞锥形瓶中，各加蒸馏水 5ml。;发酵罐;上罐前的准备及实罐灭菌;上罐前的准备及实罐灭菌;上罐前的准备及实罐灭菌;发酵操作??;发酵管理;发酵过程中各生化指标的测定 ;发酵过程中各生化指标的测定;发酵过程中各生化指标的测定;发酵过程中各生化指标的测定;发酵过程中各生化指标的测定;大肠杆菌流加发酵策略;补料方式;溶氧控制的分批补料培养;放罐;清洗;感谢观看大肠杆菌培养基的优化及发酵罐操作;目录;大肠杆菌;;; 大肠杆菌高密度培养最关键的问题是代谢副产物乙酸积累所引起的抑制和毒害作用。 预防措施： 1、通过控制比生长速率来减少乙酸的产生：比生长速率越高，乙酸产生越多，当比生长速率超过某个值时，乙酸开始产生。可以通过降低温度，调节酸碱度，控制补料等方法来降低比生长速率。 2、透析培养：在大肠杆菌的培养过程中可以用透析技术除去发酵液中的有害物质，降低乙酸含量从而实现重组菌的高密度发酵和产物的表达。 3、控制葡萄糖的浓度：葡萄糖是大肠杆菌发酵过程中重要的碳源之一，用其作碳源是要将其控制在一个较低的水平上，以减少乙酸的产生。;培养基选择;培养基配制;培养方式;培养条件;2、上罐前一天，由斜面菌种转接一级种子 将全部发酵液取出后，100℃煮沸10分钟