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不同组织的冰冻切片体会 来源：第三军医大学大坪医院病理科 作者：毛成毅，杜娟，肖华亮，李增鹏 冰冻切片原理：组织被冷冻时，组织中的水变成冰，而在这种状态中，组织变坚硬的。冰冻块的硬度可通过改变组织温度来改变。降温会使组织块更加坚硬，提高温度使组织变软。大多数非脂肪不固定组织的切片最好在-20到-25℃制作。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，多应用于手术中的快速病理诊断。 冰冻切片的制作过程中，常有许多因素影响其质量，并进一步影响结果的观察和分析，甚至会影响诊断，造成无法挽救的后果，对此我们经过比较及总结得出如下经验。 冰冻温度及组织冰冻的时间对冰冻切片质量的影响是至关重要的。 冰冻温度对细胞的影响： 温度太低，细胞容易收缩，温度太高，细胞容易膨胀，结构不清，模糊，影响冰冻诊断。充分利用冷冻台、冰锤及速冻头的功能。 将放有新鲜组织的冻托放在冻台上然后压上压板，等组织冻住后，轻敲压板，冻有组织的冻托就会下来，然后进行切片。 在实际工作中，一般冰冻机温度设定如下： 冻台温度：-18℃； 工作温度：-18℃； 冻头温度：-20℃。 （一）乳腺组织的冰冻切片 乳腺组织（纤维腺瘤，间质胶原化）含纤维组织较多，冰冻切片染色时容易脱片。 1、使用免疫组化防脱载玻片进行贴片，冰冻切片脱片率明显下降。 2、乳腺含脂肪组织比较丰富，在冰冻切片时不容易成片或展片。 3、乳腺组织在取材时，取材医生应尽量将病变周围的脂肪组织剔除。 4、当遇到脂肪组织较多，又无法剔除时，建议使用液氮。 5、充分利用冰冻切片机（速冻台）的功能。 （二）子宫肌瘤的冰冻切片 1、温度的控制： 冷冻温度是冰冻切片的关键； 冷冻室温度设定-17~-22度； 控制肌瘤组织冷冻时间，4/5组织冻好就可以； 冷冻过头时拿出冷冻室解冻软化一下。 2、包埋剂(OCT)的使用： 冻头中心滴好OCT粘好组织块，再在周围加固一圈； 虽然有可能加长了冷冻时间，但可以将组织牢牢固定住； 修片时不能太厚，要用慢进； 防止修片和切片时产生的抖动。 3、刀片和切片： 刀片的锋利程度会影响肌瘤的制片； 与常规石蜡切片一样，先用旧刀口粗修，再用新刀口摇片； 修片时只要组织完整就可以，因为越离冻头近组织块越硬； 修片要慢避免控制推头不稳造成组织擦板； 组织块进刀的方向减少阻力。 （三）脑组织冰冻切片 1、切片中的两大问题 （1）皱褶 冰晶 在制片过程中，很多因素均可影响冰冻制片质量和正确诊断，冰晶的形成就是主要因素之一。当冰晶溶解形成空泡时，会使细胞内结构移位而造成误诊。冰晶也可以引起细胞间针状裂隙，以及空泡挤压组织，导致组织正常结构改变。特别是冰晶小而多时，对组织结构损害更大，可以导致医生们无法及时地为临床提供准确的病理诊断依据。 （2）冰晶的形成 生物体是由细胞构成的，细胞中水分约占80%～90%，水在各种组织中含量最多。因为水在结冰时因氢键的交联而膨胀，所以待检的标本在冷冻过程中，水份很容易形成冰晶，使切片出现大量冰晶孔隙以及大小空泡，造成冷冻假象。在含水量较多的组织中更易发生。 2、冰晶产生的冷冻假象 一些含水量特别多的组织像脑组织、肾脏组织等冷冻时很容易产生冰晶。当组织中的水分凝固时形成球形的冰晶，挤压纤维组织条而产生泡沫样的形状，使切片出现大量冰晶孔隙以及大小空泡的冷冻假象。在有些冰冻切片中的细胞胞浆和细胞核里含有较多的空泡、空洞，也是冰晶造成的一种冷冻假象。 3、冰晶的生长速率对组织结构的影响 冰晶的大小与其生长速率成正比，而与形成速率（成核率）成反比，也就是冰晶形成的数量愈多则愈小，对组织结构影响也愈严重。有文章认为冰冻开始时，冰晶形成速率较慢，以后逐渐增加，其临界温度为-3.3℃。从-3.0℃降至-4.3℃之间，形成速率急剧增加，然后再减慢。因此，在制片时首先必须做到组织在极短的时间内骤冷速冻，才能保证镜下观察时没有冰晶干扰，组织结构才能清晰，细胞形态才能完好。 4、怎样防止与减少冰晶形成？ 怎样才能做到组织在极短的时间内骤冷速冻呢？基于上述理论，骤冷速冻的关键在于：取材的厚度、组织冷冻时的温度和时间、以及取材外部环境等。据此，可以采取以下措施，减少冰晶的形成。 5、防止与减少冰晶形成的方法： （1）重视冰冻切片环节中的速冻 组织的厚度决定着速冻的时间，如果太厚，会导致标本的表面还没有冷冻，而贴近速冻台的一面温度已经太冷。在不影响病理诊断的前提下，标本取材尽量小一些，控制在1.5cm×l.5cm×0.3cm，厚度不超过4mm，这样有利于组织的快速冻结，并将组织块尽快移到冷冻头上骤冷，以缩短冷冻时间。 （2）提前开机做好预冷 避免由于缓慢冷冻而产生冰晶。临床科室若需术中冰冻，应先通知病理科，以便提前开机做好预冷。将冰冻切片机的温度降至－20℃～－25℃。一般将冷冻箱温度降至－25℃，冷冻头温度降至