康美肤烧伤膏的抗真菌作用研究.docx

康美肤烧伤膏的抗真菌作用研究 烧伤伤口是烧灼感和烧伤感染中明显而重要的病原体。烧伤后伤口和全身感染是患者死亡的主要原因。控制感染是烧伤治疗中非常重要的环节。局部用药仍是烧、烫伤治疗中控制感染的重要手段。康美肤烧伤膏是根据闽南名医黄金钢验方,由福建地产药材九龙藤、金线莲、冰片、蜂蜡、麻油等组成,临床上主治各种Ⅱ度烧伤。本实验研究用体外抑菌试验和大鼠感染性Ⅱ度烫伤创面的动物模型,观察康美肤烧伤膏防治感染的功效。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 铜绿假单胞菌回复突变试验 质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC 27853。其它实验菌株从临床分离所得,由福建医科大学微生物教研室保存并提供。所有操作均按《全国临床检验操作规定》。 1.1.2 培养基 肉汤琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基均经121℃高压蒸汽灭菌30 min备用,其中液体培养基不加琼脂。 1.1.3 福建东南角 SD大鼠,体重180~220 g,50只,由福建医科大学动物中心提供。合格证号:SGXK(闽2004-0002号),分笼饲养,给予统一饲料。 1.1.4 试验药物 京万红烧伤膏由天津达仁堂药厂生产(批号:203417);康美肤烧伤膏(自制,定容浓度为300 g/L,放置4℃冰箱保存备用)。 1.2 方法 1.2.1 马铃薯葡萄糖培养基的制备 最小抑菌浓度的测定采用试管两倍稀释法。取无菌试管10只,于每一试管中加入液体培养基3 ml,再于第1管加入浓度为300g/L的康美肤烧伤膏3 ml混合均匀后,取3 ml加入第2管,依次类推,至第8管吸出3 ml滴入营养琼脂平皿上,供无菌检查。8只试管中的药物质量浓度为250、125、62.5、31.25、15.625、7.80、3.90、1.90 g/L,然后于1~8管加入稀释好的菌液200μl;第9管为培养物对照,第10管为培养基对照。在37℃培养18~24 h,当对照物混浊,对照培养基不混浊,以不发生混浊变化的最小浓度为该药的最小抑菌浓度。真菌培养基选用马铃薯葡萄糖琼脂培养基,方法同上,在25~28℃培养36 h。相同过程重复3次。 1.2.2 不同方法所含细菌菌落数测定 50只体重180~220 g大鼠于实验前24 h,用硫化钠脱毛,面积约30 cm2,用戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔麻醉,浸入100℃水浴槽孔(面积约30 cm2)内持续烫15 s,造成约10%Ⅱ度烫伤创面。致伤后立即腹腔注射5%葡萄糖盐水复苏。伤后5 min,用苦味酸划出创面边界,计算面积,并取经培养制备浓度为1.5×107细菌/ml金黄色葡萄球菌0.4 ml,均匀涂布于创面上。将50只大鼠随机分为5组,即京万红烧伤膏组,康美肤烧伤膏0.436、0.872、1.744 g/g(剂量均以生药量计)3种剂量组及赋形剂组。于动物伤后10 min分别对烫伤局部施以相应外用药并予以包扎。各治疗组每日换药一次,于感染后24、48 h各采样一次作创面菌落计数。 采样时,用2只消毒无菌棉签轻浸渍肉汤并挤干,先后由创面一侧向另侧滚动均匀涂抹创面一次,并立即置入盛5 ml无菌肉汤培养液中。将标本充分振荡80~100次,用无菌吸管吸取1 ml至9 ml 1%蛋白胨水稀释液中混匀,按此法连续稀释至10-2、10-3、10-4、10-5倍,吸取每一稀释液2 ml分别注入到两个灭菌平皿内,每皿1 ml。将熔化并冷却到45~50℃的营养琼脂注入平皿,每皿15 ml,以另一不加标本的空白皿作为对照。转动平皿使标本与菌液充分混合均匀,待凝固后,翻转平皿并于37℃孵育18~24 h,观察结果,计数菌落,以求得标本中所含活菌数。并折算出单位创面面积所含细菌菌落数。以t检验测定各治疗组与赋形剂对照组组间的差异显著性。同时进行3个治疗剂量组间等效性分析。 2 结果 2.1 其他常见菌株 结果表明康美肤烧伤膏的无菌培养基及空白对照培养在37℃培养18 h(真菌25~28℃,36 h)条件下,未见细菌及真菌生长。康美肤烧伤膏对金葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、甲链球菌(α-hemolytic streptococcua)、乙链球菌(β-hemolytic streptococcua)、粪链球菌(Staphylococcus faecalis)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、克雷伯菌(Klebsiella peneumoniae)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanii)、阴沟肠杆菌(Enterbacter cloacae)、白色念珠