阪崎肠杆菌检验演示文稿.pptVIP

5.1 前增菌和增菌 BPW（合适时可选择无菌水） 左图：未混合； 右图：混合后。 * 当前第23页\共有35页\编于星期五\16点 mLST-Vm mLST-Vm，即在大肠菌群增菌肉汤LST中另加入适量的NaCl和Vm 。 研究证明与其他肠杆菌科细菌（如沙门菌属、大肠埃希氏菌等）相比，ES具有较高的耐渗透压能力。加入0.5 M 的NaCl在保证ES良好生长的同时，可以有效地抑制上述其他细菌的生长。 Vm可有效地抑制G+菌的生长。而较高的生长温度可以进一步抑制其他细菌的生长。 * 当前第24页\共有35页\编于星期五\16点 5.2 分离 显色培养基的基本原理相似，二者都是根据ES能产生α-葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc产生有色菌落。 * 当前第25页\共有35页\编于星期五\16点 显色培养基对ES的选择性较好，ES形成的特征性菌落易于辨认，以DFI为例： 硫化氢指示剂可以区分ES和产生少量α-葡萄糖苷酶但H2S阳性菌株（如普通变形杆菌）。 ES都可以在该平板上生长并产生蓝绿色菌落 其他常见菌在DFI平板的菌落颜色 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希氏菌、泛菌属的多种菌等 黄色菌落：赫氏埃希氏菌 黑褐色、粉色或中心蓝绿菌落：少量菌种 ESIA:蓝色，1-3mm 国产显色培养基 * 当前第26页\共有35页\编于星期五\16点 36℃±1℃ 24 h±2h * 当前第27页\共有35页\编于星期五\16点 黄色素 TSA： 25℃培养后 典型ES：黄色 阴性对照E. coli ATCC 25922：白色菌落 * 当前第28页\共有35页\编于星期五\16点 5.3 鉴定（生化反应） 生化试验 特征 黄色素产生 ＋ 氧化酶 － L-赖氨酸脱羧酶 － L-鸟氨酸脱羧酶 （＋） L-精氨酸双水解酶 ＋ 柠檬酸水解 (＋) 发酵： D-山梨醇 （－） L-鼠李糖 ＋ D-蔗糖 ＋ D-蜜二糖 ＋ 苦杏仁甙 ＋ 注：＋＞99%阳性；－＞99%阴性；（＋）90%－99%阳性；（－）90%-99%阴性。 * 当前第29页\共有35页\编于星期五\16点 商业生化鉴定系统的应用 推荐使用的ES生化鉴定方法有很多，主要有API 20E，ID 32E，Biolog GN2 MicroPlate，VITEK GNI+等。 上述方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。 在肠杆菌的生化鉴定中使用最广泛的是API 20E和Vitek GNI+。 * 当前第30页\共有35页\编于星期五\16点 API 20E生化鉴定板典型生化反应图示 API 20E反应编码 API 20E结果评价 3345 373 Excellent identification 3305 173 Excellent identification 3305 363 Very good identification 3305 373 Good identification * Acceptable identification？ VITEK 当前第31页\共有35页\编于星期五\16点 质量控制 选择近期分离的阪崎肠杆菌阳性菌株或标准菌株作为阳性对照，检测增菌液和分离培养基对阪崎肠杆菌生长的影响和生化鉴定结果，对整个实验的操作过程进行质量控制。 * 当前第32页\共有35页\编于星期五\16点 阪崎肠杆菌检测方法的比较 2005年从10个省（市）的零售或批发市场采集的194份配方粉。FDA定性检测检出4个阳性样本，本定性检测检出5个，其中4个在第一法的检测中均为阳性，另一阳性检出样品在第一法中的检测结果为阴性。 *“粉紫色、圆形、光滑、凸起、饱满”。 * 选择性分离平板上分离株的菌落特征和样品数量 VRBGA DFI 菌落特征 样品数量 　 菌落特征 样品数量 无任何菌落生长 14 无任何菌落生长 163 直径1mm的菌落 137 1种蓝绿色菌落 5 2种菌落 6 1种白色菌落 22 典型菌落* 5（3） 白色菌落和蓝绿色菌落各1种 3 1种非典型菌落 32（1） 1种白色菌落但略显淡绿 1 合计 194 　 合计 194 当前第33页\共有35页\编于星期五\16点 第二法 阪崎肠杆菌的计数 * 当前第34页\共有35页\编于星期五\16点 3管MPN法 * 当前第35页\共有35页\编于星期五\16点 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 中国CDC营养食品所 阪崎肠杆菌检验演示文稿 * 当前第1页\共有35页\编于星期五\16点 阪崎肠杆