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基因甲基化与喉鳞状细胞癌的关系 《医学研究生学报》2014年第六期 1资料与方法 1. 1实验方法 1. 1. 1主要试剂及仪器蛋白酶K（北京艾比根生物技术有限公 司）；Tris . Base（上海拜沃生物科技有限公 司）;WizardDNAClean-UpSystem（Promega 公司）;Tap 酶（Invitrogen, USA）;甲基化转移酶（M. Sssl） （NEB公司，美国）；引物、三氯甲烷、 饱和酚、乙二胺四乙酸、十二烷基磺酸钠、无水乙醇（大连宝生生物 公司）。恒温水浴箱（SHELLAB公司，美国）；高速离心机（Eppendorf公 司）；GeneAmp9700型PCR扩增仪（ABI公司，美国）；凝胶自动成像仪 （T0CAN320型）；电泳仪（伯乐公司,美国）。 1. 1. 2DNA提取采用标准蛋白酶K消化法进行DNA提取，在提 取之前，组织标本经HE染色证实肿瘤细胞的存在，并选择恶性肿瘤 细胞275%的区域的组织提取DNAo 1. 1. 3亚硫酸氢钠修饰参照《分子克隆实验指南》进行操作[6]: 先将约2ugDNA在1. 5mLEP管中，用双蒸水稀释至50 口 L,加5. 5 口 L 新鲜配制的3molNa0H后42℃水浴30min,然后加30 口 L10mmol/L对 苯二酚至上述水浴后的混合液中；再加入520 PL3. 6mol亚硫酸氢钠 （配制:1. 88g