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虾夷扇贝MyGPx基因的启动子克隆及表达的中期报告
简介:
虾夷扇贝 (Mizuhopecten yessoensis) 是一种重要的经济贝类,广泛分布于北太平洋地区。为了深入研究虾夷扇贝免疫基因的功能和调控机制,本研究对虾夷扇贝MyGPx基因的启动子进行了克隆和表达分析。
方法:
本研究利用PCR技术从虾夷扇贝的基因组DNA中克隆了MyGPx基因的启动子序列,并通过序列分析确认克隆序列的准确性。将该启动子序列克隆到荧光素酶报告载体pGL3-Basic中,构建重组质粒pGL3-MyGPxLuc。将构建好的重组质粒转染至HEK293T细胞系中,通过双荧光素酶报告试剂盒检测pGL3-MyGPxLuc的荧光素酶活性和质粒转染效率。
结果:
经PCR扩增和测序分析,得到了长度为1412 bp的MyGPx启动子序列。利用BioEdit软件进行序列分析,发现该启动子序列含有多个保守的顺式作用元件(cis-elements),如TATA盒、CAAT盒和GATA-1结合位点等。经测定,pGL3-MyGPxLuc在HEK293T细胞中的荧光素酶活性明显高于空载体和pGL3-Basic对照组,表明该启动子序列能够驱动荧光素酶基因在细胞内的表达并产生较高的荧光素酶活性。
结论:
本研究成功克隆了虾夷扇贝MyGPx基因的启动子序列,并通过荧光素酶报告试剂盒的检测证实了该启动子序列能够驱动荧光素酶基因的表达。该研究结果为进一步深入研究虾夷扇贝免疫基因的调控机制提供了理论基础。
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