Connexins基因真核表达载体构建及其稳转细胞株的建立的中期报告.docx

Connexins基因真核表达载体构建及其稳转细胞株的建立的中期报告 [中期报告] 一、项目概述 Connexins基因是构成细胞间通道的蛋白质，参与多种细胞间通讯。本项目旨在构建Connexin基因真核表达载体，通过转染稳定转染的细胞，建立Connexin细胞株，从而研究Connexin在细胞间通讯中的功能和机制。本中期报告主要是对项目进展的汇报和总结。 二、进展情况 1. 建立Connexin基因真核表达载体 我们选择了Connexin 43基因，采用PCR扩增技术从人类基因组DNA中扩增得到Connexin 43基因，并将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建了Connexin 43基因真核表达载体pcDNA3.1-Cx43。 2. 转染 将Connexin 43基因真核表达载体pcDNA3.1-Cx43转染到HEK293T细胞中，经过筛选，获得了表达Connexin 43的细胞株HEK293T-Cx43。使用Western blot和免疫荧光技术检测了HEK293T-Cx43细胞株中Connexin 43的表达情况。 3. 电生理实验 使用双电极膜片钳技术对HEK293T-Cx43细胞株进行电生理实验，结果显示该细胞株可以形成电耦合，表明形成了Connexin 43介导的细胞间通道。 三、下一步工作计划 1. 优化转染条件和筛选方案，提高转染效率。 2. 对Connexin 43介导的细胞间通讯进行深入的研究，探究其可能的功能和机制。 3. 建立Connexin 43基因敲除细胞系，与HEK293T-Cx43进行对照，更全面地研究Connexin 43在细胞间通讯中的作用。 四、结论 本项目已成功构建Connexin基因真核表达载体，通过转染得到表达Connexin 43的细胞株HEK293T-Cx43，并初步验证了其形成Connexin 43介导的细胞间通道。下一步将进一步深入研究Connexin 43在细胞间通讯中的功能和机制。