常用的组织固定液及配制.docxVIP

常用固定液及其配制 固定液分单纯固定液和混合固定液。 甲醛（formaldehyde） 是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是 37％～40％ 得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。用作固定的浓度习惯为 10％福尔马林（即 1份甲醛溶液加 9 份水配制而成），实际含甲醛 4％。 10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好， 是最常用的固定剂。 经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。 乙醇 无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。固定用一般是 80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水， 因此核的着色不良。 中性甲醛液（混合固定液） 甲醛（浓）120ml，加蒸馏水 880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4） 13g。此液固定效果比单纯 10％福尔马林要好。 AF 液（混合固定液） 95％乙醇 90ml，甲醛(浓)10ml。也有配方是 95％乙醇 85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸 5ml。此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 以上 4 种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。 （ （1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。对组织膨胀约 5%，经酒精脱水时有较大的收缩。能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利 于染色，特别是细胞核的着色。经自来水冲洗6~24 小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。 （2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。固定的时间不宜太长，以24 小时以内为宜，适用于免疫组 织化学染色。 几种细胞固定方法 选择最佳固定液标准是： 最好地保持细胞和组织的形态结构； 最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的； 不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液， 会使上皮细胞产生非特异性荧光； 固定剂的选择、固定时间、温度和PH 值都会影响实验结果。单纯固定液 （1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规 HE 及免疫组化、PCR 等工作（Job）。中性甲醛是以 PH7.2-7.4 的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的 4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。 甲醛（40%） 100ml 无水磷酸氢二钠 6.5g 磷酸二氢钠 4.0g 蒸馏水 900ml （2）乙醇固定液：使用时以 80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。 （3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。混合固定液 乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。 甲醛（40%） 100ml 95%乙醇 900ml B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理 。无水醋酸钠 1.25g 升汞 6.0g 蒸馏水 90ml 使用前加入甲醛 10ml Bouin 固定液：非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin 液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。 饱和苦味酸水溶液（约 1.22%） 75ml 甲醛 25ml 冰醋酸 5ml Carnoy 固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。 无水乙醇 60ml 氯仿 30ml 冰醋酸 10ml Zenker 固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。 升汞 5.0g 重铬酸钾 2.5g 硫酸钠 1.0g 蒸馏水（加至） 100ml