多种质粒提取方法.docxVIP

从细菌中分离质粒DNA的具体操作材料、设备及试剂 一、材料 含PBS的E.coliDH5a或JM系列菌株，1.5ml塑料离心管(又称eppendorf管)，离心管架。 二、设备 微量取液器(20pl，200pl，1000pl)，台式高速离心机，恒温振荡摇床，高压蒸汽消毒器(灭菌锅)，涡旋振荡器，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置和恒温水浴锅等。 三、试剂 1、LB液体培养基(Luria-Bertani):称取蛋白月东(Tryptone)10g，酵母提取物(Yeastextract)5g，NaCl10g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调pH至7.5，加去离子水至总体积1升，高压下蒸气灭菌20分钟。 2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉，高压灭菌。 3、氨苄青霉素(Ampicillin，Amp)母液：配成50mg/ml水溶液，-20°C保存备用。 4、溶菌酶溶液：用10mmol/LTris?Cl(pH8.0)溶液配制成10mg/ml，并分装成小份(如1.5ml)保存于-20C，每一小份一经使用后便予丢弃。 5、3mol/lNaAc(pH5.2):50ml水中溶解40.81gNaAc?3H20，用冰醋酸调pH至5.2，加水定容至100ml，分装后高压灭菌，储存于4C冰箱。 6、溶液1:50mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris.Cl(pH8.0)，10mmol/LEDT