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WB 实验步骤详细总结 蛋白提取（所有操作在冰上进行） 裂解 配裂解液：PMSF=100：1，（裂解液和 PMSF 在-20℃保存，提前一天 4℃解冻） 取 2ml 裂解液，加 20μl PMSF 混匀 称取 30mg 组织，切碎放入标记好的 AP 管中， 加入 600μl 上述 1 中液体（加入液体与组织比例为 20：1），冰上静置 10min 匀浆 先用超纯水润洗一下匀浆机的钢头，（同时进行几组匀浆时，组间也要润洗钢头） 在匀浆机（在生化室）上每次匀浆 10s，两次 （间隔 5s），冰上静置 30min 离心（在基础 4 楼 416 室） 自带 1ml 枪以及蓝枪头和黄枪头，三个 1.5 的离心管（①，②两个标记，③加少量超纯水， ③号是为了离心平衡，对称放置） 将离心机预冷至 4℃为止，以 1200×10r/min 离心 15min 用移液枪将上层清液取出放入①②号管中 变性（上样缓冲液：样品=4：1） 将样品转移至 2~3 个 0.5mlAP 管中加上样缓冲液，100℃变性 10min 仪器屏幕： S5 S5 100．0 00：10 00：10 温 度 时间（时： 保存 变性结束后，打开 AP 管盖放一下气，然后 4℃ 保存，点样是取出即可用 WB 实验步骤 清洗玻璃板：清洗玻璃板后风干，将玻璃板对 1. 齐后放入夹中卡紧，操作时要使两玻璃对齐， 以免漏胶。 2. 配制