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填空
4 .基因工程的两个基本特点是: (1) ,(2) 。4 . (1)分子水平上的操作;(2)细胞
水平上的表达
5 .基因克隆中三个基本要点是: ; 和 。5 . 克隆基因的类型;受
体的选择;载体的选择
2. 由于不同构型的 DNA 插入EB 的量不同,它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同,SC DNA 的泳动速
度 ,OC DNA 泳动速度 ,L DNA 居中,通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA
分别开来。2. 最快;最慢
4. 就 克 隆 一 个基因(DNA 片段) 来说, 最简单的质粒载体也必需包括三个部
分: 、 、 。另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。4. 复制区: 含有复制
起点;选择标记: 主要是抗性基因;克隆位点:便于外源DNA
的插入
6. 质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值,即质粒/染色体 。
13. YAC 的最大容载能力是 1000kb ,BAC 载体的最大容载能力是 300kb 。
3 .λ噬菌体的基因组DNA 为 kb,有 多个基因。在体内,它有两种复制方式,扩增时(早
期复制)按 复制,成熟包装(晚期复制)则是按 复制。它有一个复制起点,进行 向复制。
λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在,并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体
线性DNA 分子的两端各有一个 个碱基组成的天然黏性末端。这种黏性末端可以自然成环。成环后的
黏性末端部位就叫做 位点。 48 .5 ;60 ;凯恩斯模型; 滚环; 双;12; COS
4 .根据噬菌体的包装能力,将野生型 λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体,该载体的最小分子大小
约为 kb,插入的外源片段最大不超过 kb 。 36 ; 14
5 .野生型的M13 不适合用作基因工程载体,主要原因是 和 。 没有合适的限制性内切核
酸酶识别位点;选择标记
6 .黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体,它的复制子来自 、COS 位点序列来自 ,最大的克
隆片段达到 kb 。质粒;丸噬菌体; 45
7 .有两类改造型的 λ噬菌体载体,即插入型和取代型。从酶切点看,插入型为 个,取代型为
个。1; 2
8 .野生型的丸噬菌体DNA 不宜作为基因工程载体,原因是:(1) (2) (3) 。 (1)分子量
大,(2)酶的多切点,(3)无选择标记
11 .M13 单链噬菌体基因2 和基因4 之间的IG 区有三个最重要的功能,即(1)
(2) (3) 。(1)正链复制起点; (2)负链复制起点; (3)包装信号
12.野生型的M13 有10 个基因,分为三个功能集团,其中与复制有关的两个基因是:
和 。基因 Ⅱ;基因Ⅴ
13.以λ噬菌体载体和黏粒载体构建文库时,起始DNA 的长度是不同的,前者为
kb,后者为 kb 。100kb ;200kb
14.λ噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源DNA 片段后,总的长度应在噬菌体基因
组的 的范围内。75 %一105%
5 .Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小.一般在20~40kDa ,通常由 亚基所组成。
它们的作用底物为双链DNA ,极少数 Ⅱ类酶也可作用于单链DNA ,或DNA /RNA 杂合双
链。这类酶的专一性强,它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求,而且对更远的碱基也
有要求,因此,Ⅱ类酶既具有 专一性,也具有 专一性,一般在识别序
列内切割。切割的方式有 ,产生 末端的DNA 片段或
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