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可溶性蛋白含量测定（考马斯亮蓝染色法）
试剂配制
（1） 考马斯亮蓝溶液配制：称取 100 mg 考马斯亮蓝，溶于 50ml 90%乙醇中，加入 100ml 85%
（W/V）磷酸，再用蒸馏水定容到 1L。在过夜后过滤并贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。90% 乙醇配制：95%乙醇和 75%乙醇按 3:1 体积比混合配制，即95%乙醇，75%乙醇或取 45ml 无水乙醇直接定容至 50ml。
（2）100 g/ml 牛血清蛋白（BSA）标准溶液：称取 10mg BSA 定容至 100 ml 即为 100 g/ml。或称取 25 mg BSA 加蒸馏水水溶解后定容至 100 ml，再从中吸取 40 ml 蒸馏水定容至 100ml。
（3） mol/L，磷酸配制：
A 母液， mol/L 磷酸氢二钠溶液：取Na HPO 12H2O (分子量 g，用蒸馏水定容至 500 ml。
2 4
B 母液， mol/L 磷酸二氢钠溶液：取NaH PO4 2H2O (分子量 g，用蒸馏水定容到 50 ml。
2
磷酸：分别取A 母液，B 母液，用蒸馏水定容至 1000ml。
标准曲线绘制
试剂0 号1 号2 号3 号4 号
试剂
0 号
1 号
2 号
3 号
4 号
5 号
标准蛋白体积/ml
蒸馏水体积/ml 蛋白质含量/ g
0
20
40
60
80
100
样品测定
样品提取：取鲜样—，用蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min—4000r/min 离心 10min，上清液备用。
吸取样品提取液（视蛋白质含量适当稀释），放入试管中（每个样品重复两次），加入 5ml 考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置 2min 带反应完成，在 595nm 下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查蛋白质含量。
蛋白质含量计算
可溶性蛋白含量（mg/g）=(C VT)/1000VS（mg/g） C—查标准曲线值， g； VT—提取液总体积，ml；
WF—样品鲜重，g； VS—测定时加样量，ml
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