重组Exendin-4类似物EW的克隆、表达、纯化及生物活性研究的中期报告.docxVIP

重组Exendin-4类似物EW的克隆、表达、纯化及生物活性研究的中期报告 这里是重组Exendin-4类似物EW的生物活性研究的中期报告。 一、克隆和表达： 1. 从人类胰岛素oma甲状腺癌细胞系中采集到Exendin-4的编码序列。 2. 将Exendin-4的编码序列改造成EW类似物的序列，并克隆到表达载体pGEX-4T-1中。 3. 将pGEX-4T-1-EW转化到大肠杆菌BL21（DE3）菌株中，进行过夜培养。 4. 用IPTG诱导表达，获得重组蛋白EW。 二、纯化： 1. 提取细胞赤霉素，用HisBind纯化EW和GST-作为对照。 2. 通过SDS和Western blot检测，发现EW的表达和纯化效果良好。 3. 用柱层析法对纯化的EW进行二次纯化。 三、生物活性： 1. 在动物实验中通过注射EW测试了其降血糖的效果，结果表明EW可以显著降低血糖水平。 2. 在细胞实验中测量了EW处理细胞后的环磷酰化腺苷酸（cAMP）水平变化。结果表明EW可以显著提高细胞内cAMP水平。 3. 进行了对照实验，比较了EW与Exendin-4和GLP-1的生物活性。结果表明EW与Exendin-4和GLP-1相似，均具有显著的降血糖和增加cAMP水平的效果。 综上所述，我们成功地克隆、表达、纯化了重组Exendin-4类似物EW，并证明了其具有显著的血糖调节效果和细胞内cAMP水平影