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DPPH自由基清除实验教学 (详细版) 抗氧化是指抗氧化自由基的简称，人体因为与外界的持续接触，包括呼吸(氧化反应)、外界污染、放射线照射等因素不断的在人体体内产生自由基。科学研究表明，癌症、衰老或其它疾病大都与过量自由基的产生有关联。抗氧化剂就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。一般来说，自由基可分为以下几类：超氧阴离子自由基、羟基自由基、脂氧自由基、二氧化氮和一氧化氮自由基、过氧化氢、单线态氧和臭氧(通称活性氧)。迄今为止，国内外用于评价抗氧化能力的方法已有很多，如氧自由基吸收能力法、总自由基清除抗氧化能力法、总氧自由基清除能力检测法、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基法(DPPH)、荧光光度法、化学发光法以及其它清除自由基的检测评价方法[1-2]。 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），别名1,1-二苯基-2-苦肼基(自由基);1,2-二苦基-2-三硝基苯亚肼;1,2-二苯基-2-苦肼基。DPPH是暗紫色大棱柱形晶体，一般试剂含量不小于98%。该品具有刺激性，吸入、口服或皮肤接触有害，大量使用应穿适当的防护服和戴手套。DPPH见光易分解，应在0℃左右闭光保存。DPPH常用于抗氧化成分的体外抗氧化性评价。DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质好和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517 nm 处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析。DPPH自由基清除率的测定是一种广泛使用的筛选和评价抗氧化剂抗氧化能力的方法，DPPH清除率越大表明抗氧化能力越强[3]。 实验步骤 1.用无水乙醇配置0.1mmol/L的DPPH溶液，避光保存。 2.将2mL测试样品溶液及2mLDPPH溶液加入到同一试管中，摇匀，室温下暗处静置30min后测定其吸光度A样品,同时测定2mLDPPH溶液与2mL溶剂混合后的吸光度A0。 3.计算公式: DPPH自由基清除率(%)=(A0-A样品)/A0×100 （A0为未加样品时的DPPH在517nm处的吸光度;A样品为加入样品的DPPH在517nm处的吸光度。） 参考文献： [1]梁蓉蓉，贾振斌，罗辉，等.DPPH在抗氧化活性评价中的应用[J]．广东化工.2014,41(20)：57-58 [2]谭曜，陈平，许赛慧，等.DPPH 法测定自制蜂王幼虫美白、抗衰老防皱面霜清除DPPH 自由基的能力[J]．广东化工.2019，46，（18）：143-144 [3]郭爽. 四种抗氧化剂的活性研究及测定总抗氧化能新法初探[D]．河南农业大学,2005