拟南芥蔗糖转运蛋白基因(AtSUT4)原核表达及其多克隆抗体制备的中期报告.docxVIP

拟南芥蔗糖转运蛋白基因(AtSUT4)原核表达及其多克隆抗体制备的中期报告 首先，我们成功地从拟南芥(T. thaliana)根部组织中克隆了一个蔗糖转运蛋白基因AtSUT4，并将其插入到原核表达载体pET28a中，得到了重组质粒pET28a-AtSUT4。通过PCR、酶切和测序确认了正确性。 接着，我们将重组质粒pET28a-AtSUT4转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，进行了原核表达。我们观察到在诱导下，BL21(DE3)细胞中出现了约43 kDa的蛋白质带，表明AtSUT4基因已成功表达。 我们进一步通过亲和层析纯化了表达的蛋白质，并进行了免疫原性分析。结果表明，所得到的蛋白质能够很好地激发小鼠的免疫反应，证明其具有较好的免疫原性。 最后，我们利用纯化的蛋白质制备了AtSUT4的多克隆抗体，并进行了初步检测。Western blot分析表明，所得到的抗体能够识别大肠杆菌中表达的AtSUT4蛋白质。 综上所述，我们成功地克隆了拟南芥的AtSUT4基因，并通过原核表达和亲和层析纯化得到了蛋白质，制备出了多克隆抗体，为后续研究AtSUT4的功能奠定了基础。