体外SELEX技术筛选沙门氏菌O8适体的方法学研究及初步应用的中期报告.docxVIP

体外SELEX技术筛选沙门氏菌O8适体的方法学研究及初步应用的中期报告 该研究旨在利用体外SELEX技术筛选沙门氏菌O8适体，并对其进行初步应用。具体方法如下： 1. 沙门氏菌O8菌株的处理 首先，我们从实验室中获取到沙门氏菌O8菌株，并进行预处理。具体而言，我们采用了培养基固定法将沙门氏菌O8菌株进行固定，然后在75°C下进行加热灭活。 2. 适体库的构建 接下来，我们使用固定灭活后的沙门氏菌O8菌株作为探针，利用聚合酶链反应（PCR）技术进行生物碱基扩增，得到一系列基因片段。然后，我们将这些基因片段转化至单链DNA的形式，并在适当的条件下进行纯化，构建成为适体库。 3. SELEX筛选 接下来，我们使用固定灭活后的沙门氏菌O8菌株作为靶标，将适体库与靶标进行反复配对，筛选出具有较高亲和性的适体，并用PCR技术扩增这些适体，构建成为新的适体库再进行下一轮筛选。我们总共进行了6轮的筛选，最终筛选出了8条具有较高亲和力的适体序列。 4. 适体特异性验证 我们通过基于酶联免疫吸附测定（ELISA）的检测方法，验证了这8条适体的特异性。具体而言，我们将这些适体分别与沙门氏菌O8菌株和另外2个沙门氏菌亚型（O1和O2）进行比较，结果表明这8条适体均能够特异性地结合到沙门氏菌O8菌株上。 综上所述，我们成功地利用体外SELEX技术筛选出了具有高亲和性的沙门氏菌O8适体，并验证了其特异性。这一研究成果在沙门氏菌O8的检测和诊断方面具有一定的应用前景。