OmpA信号肽介导的重组大肠杆菌生产α环糊精葡萄糖基转移酶发酵优化的中期报告.docxVIP

OmpA信号肽介导的重组大肠杆菌生产α环糊精葡萄糖基转移酶发酵优化的中期报告 本研究旨在利用重组大肠杆菌生产α环糊精葡萄糖基转移酶，并探究不同发酵条件下其最优生产情况。具体来说，我们采用OmpA信号肽将目标基因CCGTase导入大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中，并通过琼脂糖酶切和测序鉴定了重组菌株的正确性。接着，我们将重组菌株分别于LB培养基、TB培养基、SOB培养基和BHI培养基中进行发酵，并考察了不同发酵时间、不同温度和不同前驱物浓度对其生产效果的影响。 实验结果表明，重组大肠杆菌在TB培养基中的生长速度最快，也具有最高的CCGTase产量。在不同发酵时间的对比中，24h是其产生CCGTase最多的时间点。在不同温度的影响中，30℃时，重组菌株的CCGTase产量最高。而在不同前驱物浓度的对比中，1mmol/L的底物浓度能够促进最高的CCGTase产量。综合考虑，最佳生产条件是在TB培养基中，30℃下发酵24h，前驱物浓度为1mmol/L。此时，CCGTase的产量为2.87 U/mL，是其他条件下的2-4倍。这一结果为后续的进一步生产和应用提供了基础。