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介导NO信号转导的人可溶性鸟苷酸环化酶的表达纯化及其结构与性质研究的中期报告 本研究旨在研究介导NO信号转导的人可溶性鸟苷酸环化酶的表达纯化及其结构与性质。 一、表达纯化人可溶性鸟苷酸环化酶的方法 1.克隆并构建重组质粒：从人基因组中克隆出鸟苷酸环化酶基因，设计引物，并在PCR扩增后进行酶切、连接，构建出重组质粒。 2.转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株：采用热激法将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中。 3.诱导表达：在菌落细胞生长到一定密度后，加入不同浓度的IPTG诱导表达。 4.离心收集：收集菌株进行低速离心，除去培养基，获得大肠杆菌蛋白质。 5.裂解菌细胞：将大肠杆菌蛋白质进行裂解。 6.亲合层析纯化：将鸟苷酸环化酶与亲和层析树脂进行结合，利用亲和性差异进行纯化。 7.进一步层析纯化：利用对离子交换色谱及凝胶过滤的不同层析技术进行进一步的纯化。 二、人可溶性鸟苷酸环化酶的结构与性质研究 本研究利用X射线晶体学及质谱联用技术对人可溶性鸟苷酸环化酶进行结构和性质研究。 1.结构研究：将人可溶性鸟苷酸环化酶进行结晶，进行X射线晶体学研究，获得其二级结构、三级结构及空间构象。 2.质谱联用技术研究：利用质谱联用技术研究酶蛋白的理化性质、酶活性及酶催化机理。 以上是本研究的中期报告，研究结果将有望为进一步探究介导NO信号转导的机制提供重要的理论基础和实践指导。