实训项目十五内标对比法测定对乙酰氨基酚的含量.docx

实训项目十五内标对比法测定对乙酰氨基酚的含量 一、实验目的 掌握内标对比法的测定步骤和结果计算方法。 掌握样品、流动相的处理方法，掌握液相色谱仪维护基本知识。 二、实验原理 内标对比法是内标法的一种，是高效液相色谱法中最常用的定量分析方法之一。分别配制含有等量内标物的对照品溶液和试样溶液，经HPLC分析后，测得上述两溶液中待测组分(i)和内标物(is)的峰面积，按下式计算试样溶液中待测组分的浓度ci试样=ci对照灰三搏 对乙酰氨基酚(扑热息痛，PCM)为苯胺类解热镇痛药，是治疗发热、镇痛的首选药物之一。对乙酰氨基酚稀碱溶液在波长257nm附近有最大吸收，可以用于定量测定。在其生产过程中，有可能引入对氨基酚等中间体，这些杂质在上述波长处也有紫外吸收，若采用紫外分光光度法测定含量，方法影响因素较多。为避免杂质干扰，本实验采用HPLC内标对比法测定对乙酰氨基酚含量。 三、主要仪器和试剂 仪器 高效液相色谱仪；C18色谱柱(4.6mmX150mm，5pm)；电子天平；容量瓶;移液管。 试剂 对乙酰氨基酚对照品：非那西丁对照品；对乙酰氨基酚原料药；甲醇(色谱纯)；重蒸馏水；针头滤器(0.45pm，有机系)。 四、操作步骤 色谱条件 色谱柱：C18色谱柱(4.6mmX150mm，5pm)；流动相：甲醇-水(60：40)；流速：0.6mL/min；检测波长：257nm；柱温：室温；进样量：20pL。 内标溶液的配制 精密称取非那西丁对照品约0.2500g，用适量甲醇溶解后加入100mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得内标溶液。 对照品溶液的配制 精密称取对乙酰氨基酚对照品约0.0050g，用适量甲醇溶解后加入100mL容量瓶中，再精密加入内标溶液10.00mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1.00mL，置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀即得。 试样溶液的配制 精密称取对乙酰氨基酚样品约0.0050g，用适量甲醇溶解后加入100mL容量瓶中，再精密加入内标溶液10.00mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀；精密量取1.00mL，置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。 进样分析 对乙酰氨基酚对照品溶液经0.45pm滤膜滤过。用微量注射器吸取滤液，过进样20pL。记录色谱图，重复3次。以同样方法分析试样溶液。 五、数据记录与处理 按下表记录峰面积，按下式计算对乙酰氨基酚的百分含量。 W（%）=*试样Wx.dol =圣）对照、’’试样 式中mj对照是对照溶液中组分i的量。 流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止滋生细菌变质。 实验中可通过选择适当长度的色谱柱，调整流动相中甲醇和水的比例或流速，使对乙酰氨基酚与内标物的分离度达到定量分析的要求。 内标对比法是内标校正曲线法的应用。若已知校正曲线通过原点，并在一定线性范围内，则可用内标对比法测定。该法只需配制一种与待测组分浓度接近的对照品溶液，并在对照品溶液与试液中加入等量内标（可不必知道内标物的准确加入量），即可在相同条件下进行测定。 七、问题与讨论比较外标法与内标法、内标对比法定量的优缺点。 如何选择内标物质以及内标物的加入量？ 实验中试样溶液和对照品溶液中的内标物浓度是否必须相同？为什么？