板书5 实验五 Folin酚法测定人体血清蛋白含量.doc

【板 书】 实验五 Folin酚法测定人体血清蛋白含量 实验目的 1、熟练掌握分光光度仪的规范化操作程序和注意事项； 2、熟练掌握微机绘制标准曲线的一般方法和步骤； 3、掌握Folin酚法定制牛血清蛋标准曲线的原理和操作注意事项。 4、对比双缩脲法测定蛋白含量方法，分析，归纳总结Folin法测定蛋白含量的优点。 实验原理 Folin酚法定制牛血清蛋标准曲线、测定人体血清蛋白含量原理 实验操作 1、Folin法定制牛血清蛋白标准曲线： （1）、准确配制200ug/mL牛血清蛋白标准溶液； （2）、按下表进行牛血清蛋白标准曲线加样操作； （3）、按下表进行标准曲线定制及样品测定加样操作及OD值测定； （4）、微机处理数据：确定其回归方程、定制Folin酚法牛血清蛋标准曲线。 表1 Folin法定制牛血清蛋白标准曲线及人血清样品测定加样操作和OD值测定表 2、人体血清蛋白含量测定 （1）人体血清蛋白待测液配制：用pH7.8的0.03 mol/L的磷酸缓冲液将新鲜人体血清蛋白稀释1000倍； （2）按表1操作测定人体血清蛋白OD值。 实验结果分析与数据处理：（注：当r≤0.9900时，需重点进行实验误差分析） 计算人体血清蛋白待测液的显色浓度，再由此显色浓度，计算人体血清蛋白含量（mg / mL） 报告书写要求 按定量分析实验报告书写格式书写，加样表和数据处理表以及标准曲线用电脑处理后打印后与实验报告粘贴在一起。（注意打印报告单与实验报告的粘贴方式） 思考题 1、请列表从检测原理、样品测定范围、标准品使用浓度与消耗量、检测结果准确性、操作难易程度、测定方法的局限性与应用等方面，对双缩脲法与Folin酚法测定蛋白含量的方法进行分析归纳总结。 2、Folin酚试剂中，Folin酚甲和Folin酚乙在反应中各起什么作用？