生物化学实验指导.docVIP

PAGE PAGE 1 生物化学实验指导 李峰 李荣 张建平 编 湖南文理学院生命科学系 前 言 生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物体内化学分子的结构与化学反应的机理，从分子水平探讨生命现象的本质，并为人类服务的一门实验科学，是生物科学、农学、动物科学专业、生命学科相关专业本科生及与湖南省中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。它是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上开设的实验技术。旨在培养具有现代生物学知识，掌握现代生物化学技术的创新人才培养具有现代生物学知识前沿、掌握现代生物学基本技术，具有综合设计、创新实验能力的创新人才。 《生物化学实验指导》是熊大胜教授主持的“生物学基础实验‘531’课程体系研究”的实验教材之一。生物化学实验模块按生物化学及生化大实验的实验功能构建，承担《生物化学实验》及《生物化学与分子生物学大实验》。生物化学实验模块以提高学生应用生物化学原理和方法，解决生产实践中的实际问题为目标，改革以往生物化学实验教学大纲，从加强基础的观点出发，侧重于学生基本技能，综合能力，创新能力三个层次的培养，同时也注意增加一些新近发展起来的重要的生物化学研究方法和技术。 生物化学实验模块共包括15个实验。实验注重加强学生基本技能的培养，使学生掌握蛋白质和核酸的基本结构及组分鉴定方法；掌握蛋白质性质的综合测定，了解蛋白质沉淀和变性等重要概念；掌握最常用的蛋白质制备、分离和纯化过程和方法；通过淀粉酶的提取，活性测定以及淀粉酶动力学分析实验，加深对酶的特性认识；进一步熟悉掌握微量滴定法的基本操作技术；注重培养学生综合能力，通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作，掌握氨基酸含量的测定方法；掌握核酸的提取过程以及核酸含量和纯度的测定技术；熟悉掌握电泳技术的基本原理和操作技术；血糖的定量测定和脂肪酸的β－氧化实验，掌握有关物质代谢中生理生化指标的测定方法；在生化大实验中开设了《总RNA的提取及鉴定》和《半定量RT-PCR检测基因的表达差异》两个综合性大实验；本实验模块还开设了为期6周的选修开放项目《基因的克隆、鉴定及生物信息学分析》（创新实验），使学生更好的将基础知识与专业技术衔接。通过该实验课的基本训练，使学生掌握常见生物化学及分子生物学技术的原理和方法，提高学生独立思考、观察、分析问题和解决问题的能力，同时培养学生的创新意识、科学素养和科研能力。通过实验，巩固和加深生物化学课程的基础理论知识，为今后的科学研究打下坚实的生物化学基础。 编者于湖南文理学院 2004年12月 目 录 第一篇 常用生物化学实验技术及原理 第一章 透析 …………………………………………………（1） 一、膜 ……………………………………………………………………（1） 二、溶剂 ……………………………………………………………………（1） 三、物理条件 ………………………………………………………………（2） 四、Donnan 平衡 …………………………………………………………（2） 第二章 层析法 …………………………………………………（3） 一、柱层析法的一般技术……………………………………………………（3） 二、几种常见的层析法 ……………………………………………………（5） 第三章 电泳技术 ……………………………………………（18） 一、电泳技术的基本原理……………………………………………………（19） 二、纸电泳 …………………………………………………………………（21） 三、醋酸纤维薄膜电泳………………………………………………………（22） 四、琼脂糖凝胶电泳 ………………………………………………………（22） 五、聚丙烯酰胺凝胶电泳 …………………………………………………（23） 第二篇 学 生 实 验 实验一 蛋白质的性质实验 …………………………………（30） 实验二 牛乳中蛋白质的提取与鉴定…………………………（35） 实验三 氨基酸的分离鉴定——纸层析法……………………（37） 实验四 酶的特性………………………………………………（39） 实验五 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定……………………（46） 实验六 紫外分光光度法测定核酸的含量……………………（49） 实验七　维生素C的定量测定…………………………………（51） 实验八 血糖的定量测定——GOD-PAP法………………………（54） 实验九　脂肪酸的β－氧化……………………………………（57） 实验十 DNA的琼脂糖凝胶电泳………………………………（60） 实验十一 蛋白质的透析………………………………………（62） 实验十二