人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和表达的中期报告.docxVIP

人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建和表达的中期报告 中期报告： 一、研究背景 CITED2 (CBP/p300-Interacting Transactivator with ED-rich Tail 2) 是一个转录调控因子，在胎儿发育中发挥重要作用，与人类先天性心脏缺陷、先天性肺动脉瓣狭窄等疾病相关联。先前的研究发现，野生型CITED2具有抑制心肌细胞的增殖和促进心肌细胞分化的作用，而突变型CITED2则失去了这种功能，导致了上述疾病的发生。因此，研究CITED2的分子机制，对于揭示先天性心脏缺陷等疾病的发生机制具有重要意义。 二、研究内容： 本研究旨在构建CITED2的真核表达质粒，并实现野生型CITED2和突变型CITED2的表达。具体步骤包括：选取适合的表达载体，放置目标基因的基因片段，进行PCR扩增、酶切和质粒转化等步骤。其中，突变型CITED2基因片段需要通过点突变的手段进行制备。接下来，我们将进行质粒的测序鉴定，同时开展RNA干扰和蛋白质相互作用实验，分析野生型CITED2和突变型CITED2对心肌细胞增殖和分化的影响。 三、进展情况： 目前，我们已完成了CITED2基因的PCR扩增，并通过限制性内切酶进行了酶切。我们将目标基因片段和表达载体进行连接，并将其转化至大肠杆菌中，进行高通量筛选和培养。同时，我们也成功地进行了点突变，并进行了质粒测序确认。 四