小叶杨杂种再生体系建立及农杆菌介导遗传转化体系的初步研究的中期报告.docxVIP

小叶杨杂种再生体系建立及农杆菌介导遗传转化体系的初步研究的中期报告 本研究旨在建立小叶杨杂种（Populus × euramericana）再生体系和农杆菌介导的遗传转化体系。本文是该研究的中期报告，主要介绍杂种再生体系的建立和初步实验结果。 首先，我们通过试验确定了小叶杨杂种的最适生长条件。在MS培养基上，以3%蔗糖为碳源、0.3%月桂酸为生长调节剂，pH值为5.8时，小叶杨杂种的生长最为旺盛。在这一生长条件下，我们成功地培养出了小叶杨杂种的愈伤组织。 接着，我们对小叶杨杂种的愈伤组织进行了不同培养条件的尝试，最终确定了最适宜的再生培养条件。在MS培养基上，以3%蔗糖为碳源、0.05%吲哚乙酸为生长调节剂，pH值为5.8时，小叶杨杂种的愈伤组织可以成功地再生。 在建立了小叶杨杂种的再生体系后，我们开始进行农杆菌介导的遗传转化实验。首先我们构建了含有GUS基因和bar基因的质粒，将质粒转化至农杆菌中。接着我们将农杆菌注射到小叶杨杂种的愈伤组织中，并进行了不同浓度的耐除草剂Basta的筛选。实验结果表明，注射后7天，愈伤组织中有明显的GUS染色，说明GUS基因已经转化成功。而在Basta抗性筛选中，以25mg/L Basta最为有效，可以筛选出大多数转化株。 总的来说，本研究成功建立了小叶杨杂种的再生体系，并在此基础上初步建立了农杆菌介导的遗传转化体系，为后续对小叶杨杂种的基因功能研究提供了重要的实验基础。