黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的抗菌性分析的中期报告.docxVIP

黄喉拟水龟转铁蛋白基因的克隆、表达及重组蛋白的抗菌性分析的中期报告 本实验旨在克隆黄喉拟水龟转铁蛋白基因并进行表达，最终研究该重组蛋白的抗菌性。本次报告为实验的中期报告。 1.基因克隆 本实验使用黄喉拟水龟的肝脏组织提取总RNA，进行RT-PCR反应，克隆得到了转铁蛋白基因的全长序列。随后，使用基因克隆载体pET28a将其插入至载体中，得到了重组质粒pET28a-Tf。 2.表达优化与重组蛋白纯化 通过实验比较，我们发现在IPTG 1 mM浓度下，温度在37℃的条件下诱导表达效果最佳。经SDS分析，我们克隆出的重组蛋白大小约为30 kDa，符合理论值。利用His-Tag亲和层析纯化大量蛋白，得到250 mg/L的纯化重组蛋白，纯化后进行动态光散射实验，证明蛋白的质量和形态都相对稳定。 3.抗菌性分析 为了研究重组蛋白的抗菌性，我们进行了抗菌圈实验和最小抑菌浓度(MIC)实验。实验结果表明，在浓度为5μM时，重组蛋白对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有相对较好的抑制作用。而求得的MIC值分别为20 μM和30 μM，表明重组蛋白在该浓度下能够有效抑制这些细菌的生长。 综上所述，我们成功克隆出了黄喉拟水龟转铁蛋白基因，并进行表达和纯化。实验结果还表明，我们得到的重组蛋白具有较强的抗菌性。下一步我们将进一步深入探究该蛋白的抗菌机制和应用前景。