突变体筛选课件.pptxVIP

ﻍ 一、多种检测手段相结合，初筛与复筛相 结合 ﻍ 二、离体筛选与常规育种相结合 突变体筛选的一般原则 ﻍ 从再生植株中直接筛选有用突变株 ﻍ 对离体培养物的筛选 ﻍ 绿岛法 体细胞无性系突变体筛选的方法 过程 外植体离体培养t产生愈伤组织t分化成苗 t定植于大田或者营养钵中t成熟t采收 种子 t次年t按照株系种植t常规育种选 育 从再生植株中直接筛选有用突变株 ﻍ 直接筛选法 ①正选择法(主要对抗性突变体的筛选) ②负选择法(主要对营养缺陷型或者温 度敏感型突变体的筛选) ﻍ 间接筛选法 对离体培养物的筛选 直接筛选法 ﻍ 首先确定选择方向 ﻍ 可采用化学物质(如高浓度盐类、碱类、 除草剂、抗生素、真菌毒素、重金属和特 定代谢物等)和物理条件(低温、高温等) 处理 ﻍ 筛去正常细胞，获得抗性愈伤组织或抗性 细胞系 ﻍ 再生获得抗性突变体植株 正选择法 ﻍ 直接作用于突变体 ﻍ 突变体产生后,在最适培养基中加入对正常细胞有 害的化学物质→正常细胞死亡而突变细胞可以生 长 ﻍ 抗此物质的突变体细胞继续生长,从而可将其选择 出来. ﻍ 一步选择法或者多步选择法 【 ﻍ例】在水稻抗病育种中,用病茵毒素或病茵毒素 结构类似物为选择剂,已筛选出不少抗病植株. 一步选择法和多步选择法 ﻍ 一步选择法：所用筛选呀可一次性消灭正 常细胞 【对单基因性状的抗性筛选】 ﻍ 多布筛选法：先加入低剂量的选择剂，是 一部分细胞不能正常生长，再逐步加大剂 量，进行多布筛选，得到耐受最高选择的 突变细胞团。 【对多基因控制的抗性筛选 】 负选择法 ﻍ 使用特定培养基 ﻍ 让突变体细胞受到抑制不分裂呈休眠状态 而正常细胞正常生长 ﻍ 用一种对休眠态突变细胞无害而能毒害正 常细胞的药物淘汰掉正常型细胞 ﻍ 最后用正常培养基恢复突变细胞的生长 -5 ﻍ溴去氧尿苷负选择系统 ﻍ 高氯酸盐负选择系统 5-溴去氧尿苷负选择系统 突变体产生后,在培养基中加入10mol/L 的5-溴脱氧尿嘧啶，它渗入正常细胞合成 DNA中的胸腺嘧啶部位,用光照射,正常细胞 死亡,突变细胞因DNA合成停止,DNA中无5- 溴脱氧尿嘧啶的渗入,光照后仍能存活。将 存活的突变体细胞立即转入相应的补充培 养基中,就可继续生存,该系统杀死的是正 常细胞,而不是作用于突变细胞。 间接筛选法 ﻍ 缺乏直接选择表型指标或者直接选择条件 对细胞不利时 ﻍ 借助与突变表型有关的形状作为选择指示 或者筛选压 ﻍ 如：脯氨酸含量可以用来鉴定抗逆突变体 温度敏感型突变体的筛选 ﻍ 这方面的工作主要有抗旱、耐低温突变体的筛选 干旱时细胞内脯氨酸含量急剧上升，苯丙氨酸含 量则显著下降，因此可利用这一指标进行抗干旱 突变体筛选。 ﻍ 耐低温突变体的筛选主要是以悬浮细胞培养为实 验材料，在0℃-2℃条件下培养,然后从存活的细 胞系中进行耐低温突变体选筛。 Handa等用聚乙二 醇为选择剂，选出了具耐寒特性的番茄细胞系， 但经继代培养后，细胞的耐旱特性逐渐丧失了。 ﻍ 也称为“原位筛选” ﻍ 许多重要基因在培养细胞处于无组织、无 器官的未分化状态并不表达，无法通过表 型进行筛选 ﻍ 适用于抗除草剂和抗病毒突变体的筛选 ﻍ 一般选用单倍体植株 绿岛法 一般选用单倍体植株,用500拉德的γ射 线照射后喷洒除草剂或接种病毒。敏感细 胞受害坏死,抗性突变细胞保持原色,在受 害细胞间形成绿岛,取下绿色组织灭茵后进 行培养,并诱导其形成愈伤组织和再生植株, 然后用秋水仙素处理,使其成为二倍体,就 可获得具抗性的突变体。 外植体(茎段、未成熟胚等) →诱变愈伤 组织无性系→ (诱变剂) →诱导体细胞变 异→ 诱导愈伤组织继代培养→筛选抗性细 胞系→ (选择剂) →诱导抗性细胞植株再 生→再生植株的抗性鉴定→再生植株的田 间种植及抗性鉴定→抗性品种(系)的比 较及选育 体细胞无形细细突变体筛选的程序 ﻍ 细胞学、生物化学、遗传学方面 ﻍ 分析：相关酶活性分析、染色体观察与核 型分析等 ﻍ 鉴定：离开筛选压后变异表型持续稳定、 变异表型能通过有性繁殖遗传等 突变细胞的遗传分析和鉴定 ﻍ 在农业上的应用 筛选高产(如高蛋白、千粒重)、抗性品 种(如抗病、抗旱、抗盐、抗除草剂) ﻍ 在植物细胞大规模培养生产次生代谢物中 的应用 筛选高产细胞株(如高产稳产花青素的铁 海棠细胞株) 植物细胞无性系突变体筛选的应用 对玉米耐盐愈伤组织的筛选 • 以玉米杂交种郑22x综3的幼胚愈伤组织为 材料 • 在加有NaCl和羟基脯氨酸(Hyp)的筛选培养 基上，连续筛选5代 • 获得耐NaCl和耐Hyp的愈伤组织变异体。 例 • 两种变异体具有较高的脯氨酸含量和较低 的渗透势; • 经比