牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定 高效液相色谱法.pdfVIP

牙膏中6-甲基香豆素、二氢香豆素、7-甲基香豆素、7-甲氧基香豆素、 7-乙氧基-4-甲基香豆素的测定 高效液相色谱法 警示——使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关规定的条件。 1 范围 本文件描述了牙膏中6- 甲基香豆素、二氢香豆素、7- 甲基香豆素、7- 甲氧基香豆素、7- 乙氧基-4- 甲基 香豆素的高效液相色谱测定方法的原理、试剂和材料、仪器设备、试验步骤、结果计算、回收率和精密 度、允许差等内容。 本文件适用于牙膏中6- 甲基香豆素、二氢香豆素、7- 甲基香豆素、7- 甲氧基香豆素、7- 乙氧基-4- 甲基 香豆素的测定。 本文件中6- 甲基香豆素、二氢香豆素、7- 甲基香豆素、7- 甲氧基香豆素、7- 乙氧基-4- 甲基香豆素的检 出限均为0.3 mg/kg，定量限均为1.0 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 牙膏中6- 甲基香豆素、二氢香豆素、7- 甲基香豆素、7- 甲氧基香豆素、7-乙氧基-4- 甲基香豆素经甲醇 提取后，采用高效液相色谱-二极管阵列检测器检测，以保留时间和光谱图定性，外标法定量 5 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为色谱纯。 5.1 水：GB/T 6682 ，一级。 5.2 甲醇。 5.3 乙腈。 5.4 磷酸：分析纯。 5.5 甲酸。 5.6 0.1%磷酸溶液 （体积分数）：取1 mL 磷酸 （5.4 ），加入999 mL 水 （5.1 ），混合均匀。 2 5.7 20% 甲醇溶液（体积分数）：准确量取20 mL 甲醇（5.2 ），加水 （5.1 ）至100 mL，混合均匀。 5.8 标准品：6- 甲基香豆素、二氢香豆素、7- 甲基香豆素、7- 甲氧基香豆素、7- 乙氧基-4- 甲基香豆素标 准品的英文名称、CAS 号、分子式、相对分子质量和化学结构式见附录A 表A.1 ，纯度均不小于98%。 5.9 标准储备液：分别准确称取各标准品 （5.8 ）10 mg （精确至0.0001 g ）于10 mL 容量瓶中，用甲醇 （5.2 ）溶解并稀释至刻度，即得质量浓度为1000 µg/mL 的标准储备液。于2 ℃ ~ 8 ℃避光保存，可保 存6 个月。 5.10 滤膜：孔径0.22 µm，材质为聚四氟乙烯。 6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。 6.2 分析天平：感量0.001 g 和0.000 1 g。 6.3 漩涡振荡器。 6.4 超声波清洗仪：工作频率不低于40 kHz 。 6.5 离心机：最高转速不低于10 000 r/min 。 6.6 氮吹浓缩仪。 7 试验步骤 7.1 试样处理 称取1 g （精确至0.00 1 g）试样，置于50 mL 具塞离心管中，准确加入10 mL 甲醇 （5.2 ），具塞后 涡旋混合混匀，超声15 min 。冷却后10 000 r/min离心5 min 。取1.0 mL上层清液于玻璃试管中，45 ℃氮吹 至干，加入1.0 mL 20% 甲醇溶液（5.6 ）复溶，经0.22 μm滤膜过滤后待高效液相色谱仪测定。 7.2 测定 高效液相色谱测定参考条件如下： a) 色谱柱规格：T 色谱柱，1.8 μm，150 mm ×2.1 mm ，或性能相当者； 3 b) 流动相：乙腈 （5.3 ）：和0.1%磷酸溶液，梯度洗脱条件见表1； c) 流动相流速：0.3 mL/min ； d) 柱温：30℃； e) 检测波长：225 nm和320 nm； f) 进样量：10 μL 。 表1 流动相梯度洗脱条件 时间 （min ） 乙腈（% ）