齐鲁医学大肠杆菌基因工程(2).pptVIP

;第五章 外源基因的表达; 一、大肠杆菌基因工程;（一）E.coli作为表达外源基因受体菌的特征;E.coli表达外源基因的优势：;E.coli表达外源基因的劣势：;（二）外源基因在E.coli中高效表达的原理;启动子 终止子 核糖体结合位点 密码子 质粒拷贝数;1、启动子(promoter, P); 因此，E.coli表达载体所用的启动子必须是E.coli启动子。 ;位于转录起始点上游35bp处，由10bp组成，5’-TGACA。;-35区与RNA聚合酶s亚基结合 -10区与RNA聚合酶的核心酶结合 ;-10区和-35区的碱基组成及其间隔序列。;-10和-35区与保守序列（5’-TATAAT、5’-T GACA）相似度越高，启动子活性越强。; 大多数E.coli启动子与所属基因转录起始点之间的距离是6-9bp，但对外源基因而言，这个距离范围未必最佳。 ;1）启动子最佳距离的探测; 将目的基因插在一个强启动子下游，若克隆菌内检测不到mRNA，有必要考虑调整启动子与基因之间的距离。;2）启动子的筛选：;3）启动子的构建：;4）启动子的可控性：;措施： ; 目前广泛应用的E.coli可控性启动子来自相应的操纵子，都含有与阻遏蛋白特异性结合的操纵子序列，其介导的外源基因在E.coli中通常以极低的基底