蛋白真核表达载体的构建方法.docxVIP

蛋白真核表达载体的构建方法 实验目的 构建真核表达载体，用于蛋白的真核表达。 实验原理 将克隆基因插入合适的载体后导入到真核细胞中用于表达大量蛋白 质的方法。在蛋白质纯化、定位及功能分析等方面都有应用。 实验试剂 Tag DNA 聚合酶、DNA Marker DL2000 及 DNA Marker DL15000 (TaKaRa) ； Pfu高保真酶(Stratagene) ； T4 DNA 连接酶、EcoR I、 BanHI和Hind III限制性内切酶(Fermentas) ；E.Z.N.A. Gel Extraction Kit Plasmid Mini Kit (Omega)；抗生素(BBI)；蛋白豚和酵母提取物 (OXOID ) o LB固体培养基(低盐)：在LB液体培养基中加入1.5%琼脂粉，在 121℃高压下蒸气灭菌20 min。待培养基温度降至50℃左右，加入相应 的抗生素后，铺制平板，待培养基凝固后，倒放置于4c保存备用。 LB液体培养基(低盐)：将胰蛋白陈(Tryptone) 10 g,酵母浸出 物(Yeast Extract) 5 g, NaCl 5 g,溶于适量去离子水中，完全溶解后用 5moi/LNaOH调pH值至7.0?7.2,定容至1000mL,在121℃高压下灭菌20 min,室温保存。 氨苇青霉素(Ampicillin, Amp)：用灭菌去离子水配