SF_T0115-2021血液中45种有毒生物碱的液相色谱-串联质谱检验方法.pdfVIP

SF/T 0115—2021 血液中45 种有毒生物碱的液相色谱-串联质谱检验方法 1 范围 本文件描述了血液中45种有毒生物碱的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）的检验方法，包括原理、 试剂、仪器和材料、定性分析、定量分析以及分析结果评价。 本文件适用于血液中45种有毒生物碱的定性定量分析。其它检材中45种有毒生物碱的定性定量分 析参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 血液中的45种有毒生物碱在碱性条件下用有机溶剂提取和净化后，用液相色谱-串联质谱法(LC- MS/MS)进行检测，经与平行操作的空白样品和添加样品比较，以保留时间、特征离子对和离子对丰度比 进行定性分析；以定量离子对峰面积为依据，采用内标法或外标法进行定量分析。 5 试剂、仪器和材料 试剂 试验用水应为符合GB/T 6682 中规定的一级水，所用试剂和要求如下： a) 乙腈：HPLC 级； b) 50%甲酸溶液：HPLC 级； c) 甲醇：HPLC 级； d) 乙醚：分析纯； e) 乙酸铵：色谱纯； f) pH9.2 硼砂缓冲液：分析纯； g) 20mmol/L 乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）：分别称取乙酸铵1.54g 和50%甲酸溶液2mL 置于1000mL 容量瓶中，加水定容至刻度，pH 值约为4； h) 混合溶液[乙腈:20mmol/L 乙酸铵溶液 （含0.1%甲酸） （7:3，v/v）]； i) 45 种有毒生物碱对照品储备液：分别精密称取45 种有毒生物碱对照品各适量，用甲醇配成质 量浓度为1.0mg/mL对照品储备液，置冰箱中冷冻保存，有效期为12 个月； j) 45 种有毒生物碱对照品工作液：试验中所用其它质量浓度的对照品工作液均由符合5.1 i)的 对照品储备液用甲醇稀释而得。密封，置于冰箱中冷藏保存，有效期为3 个月； k) 内标物SKF525A 对照品储备液：精密称取SKF525A 适量，用甲醇配制成1.0mg/mL SKF525A 对照品储 备液，置冰箱中冷冻保存，有效期为12个月； 1 SF/T 0115—2021 l) 内标物 SKF525A 对照品工作液：将符合 5.1 k) 的内标物 SKF525A 对照品储备液用甲醇稀释得 1µg/mL SKF525A 内标工作液，置冰箱中冷藏保存，有效期为3 个月。 仪器和材料 仪器和材料包括： a) 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）； b) 电子天平：分度值≤0.1mg； c) 涡旋混合器； d) 离心机：转速4000r/min； e) 移液器； f) 恒温水浴锅； g) 微孔滤膜：0.22m。 6 定性分析 样品前处理 6.1.1 案件样品 取血液1mL，加1µg/mL SKF525A 内标工作液10L，加pH9.2 硼砂缓冲液1mL 后，用乙醚3mL 提取， 涡旋混合，3000r/min 离心3min，将乙醚层转移至另一试管中，按照同样的方法提取两次，合并乙醚液， 置60C 水浴中挥干，残留物用混合溶液[乙腈:20mmol/L 乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）（7:3，v/v）]100L 复溶，过0.22m 微孔滤膜，供仪器分析。 6.1.2 空白样品 取空白血液1mL，加1µg/mL SKF525A 内标工作液10L，然后按照6.1.1 的方法操作。 6.1.3 添加样品 若案件样品中出现可疑生物碱（参见附录A），则取空白血液1mL，添加案件样品中出现的可疑生 物碱对