摇菌岗位工作手册.docxVIP

摇菌岗位工作手册 一、 工作职责 按照SOP规定完成菌液样品收样及扩繁活化客户所送的菌液样品工作，并负责组 内相关仪器维护，准确地将所摇出的菌交接给提质粒岗，保证摇菌的成功率，对摇菌物 料的监控与质检。 二、 工作内容 找出并排列好需要处理的菌液（新样品，客服安排的重摇，模板空，前一天的重 摇菌液） 清理（打扫培养室，擦摇床，清理冰箱） 灭菌（培养室的灭菌，器材的准备、灭菌） 准备接菌和摇菌 打摇菌表 查看交接，返样 清理桌面，保存样品，做好记录和交接 三、 一般工作流程 查看前一天摇菌质量以及提质粒人员的反馈信息，并判断是否需要对未摇出的 菌液样品进行优化一一＞清理培养室后开始臭氧一一＞准备灭菌器材进行灭菌一一＞ 臭氧 半小时后开抽风一一＞ 收取菌液样品（排序，给流水号）一一＞ 抽风半小时后擦摇床并摆 放当天摇菌需用物品，紫外灭菌一一＞查看客服交接内容和前一天菌液样品提质粒结果， 找出客服安排需处理的菌液样品和重摇的菌一一＞收完菌液样品后，对样品进行接菌安 排（双份，单管）一一预冷器材，分装培养基，接菌，摇菌一一清理超净工作台，保 存当天收取菌液样品并填写好相关生产记录一一＞打摇菌表，做好交接一一＞ 返样一一＞ 清理收样室 注：每个星期每隔一天需要用巴氏消毒液给培养间拖地消毒，周四需要预测摇菌物料消 耗情况并按需求领料，定期需对冰箱已处理菌液进行装袋封存（一个月） 四、 常见问题及注意事项 1.摇菌未摇出：可能原因如下: 异常情况 处理方法 用错抗生素 查看未摇出样品的抗性，检 查是否抗性用错 改用正确抗生素安排重新 摇菌 菌液较澄清 查看菌体是否清澈，有无菌 体 接菌前可预先进行活化并 加大接菌量 菌液量太少 可直接反馈给客户 菌体活力情况 查看是否菌体已死（菌液样 品严重沉淀，菌体偏白） 可将菌液样品情况反馈给 客户 大载体，低拷贝 片段大小大于4K,拷贝数低 单管摇菌 抗生素浓度低 大批量样品出现菌液摇不 出 平板挑取的菌落活性不 足 查看平板菌落大小（出现的 小白点过小） 接菌前先进行小摇活化 注：（1）检查摇床是否出现过不正常，比如说不小心关掉，温度不正常，转速达 不到等 （2） 操作的时候，严格按无菌操作流程做（杜绝外来污染源） （3） 确保摇菌时间最起码要在9个小时以上 沉降菌： 步骤： （1） 将玻璃培养皿清洗干净烘干后用报纸包扎好，连同配好的LB培养基放入灭 菌锅里高温灭菌后后使用（培养皿灭菌后应放进烘箱烘干后使用） （2） 在超净工作台按采样需要将灭菌过的LB培养基平铺到各培养皿上 （3） 待培养皿上的LB培养基凝固后将相应的培养皿开盖放在相应的监控区域 （4） 15min后回收各监控区域的培养皿倒置放在小摇床上37摄氏度培养48小 时 注： （1） 实验前要将涉及沉降菌的器材准备充足并进行彻底灭菌 （2） LB固体培养基必须无任何抗生素 （3） 测试前要确保被测试洁净区已经过消毒处理 （4） 采样需注意每个需测试空间的采样点不低于4个，平皿不低于4个，恒温震荡培 养箱和洁净工作台内采样点和平皿数不低于2个 （5） 挑菌间和摇菌间测试应在空调净化系统正常运行30min以后进行 根据将要摇菌的数量配制培养基，需准备灭菌的物品如下： （1） 每周一配制1600ml2*YT培养基;若有大量菌需要培养，则根据具体量确定（必须 使用质检合格的试剂原料和实验耗材 （2） 周一至少准备8盒200ul黄枪头，1盒1000ul蓝枪头，8个96孔深孔培养板 （3） 检查15ml和50ml离心管是否充足 （4） 牙签、离心管、封口膜 注意：要使用质检合格的试剂耗材：在试剂瓶上贴有合格标签，在质检记录本上有保质 期等信息，若有疑问需咨询质控人员，每个月中旬要进行一次沉降菌实验。 培养基 2*YT:酵母粉（Yeast）、胰蛋白胨（Tryptone）、氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、磷 酸二氢钾、硝酸钾、水【121摄氏度，20分钟灭菌锅内灭菌】｛4摄氏度冰箱内保存， 三天内用完｝ LB：酵母粉（Yeast）、胰蛋白胨（Tryptone）、氯化钠、琼脂粉 加培养基：在加样槽外套一只紫外消毒的PE手套，将已加抗生素的培养基倒进加样 槽中，倒培养基前先将锥形瓶瓶口在酒精灯外焰过火，倒的时候注意不能将液体倒 出手套外，倒完后重新将瓶口封好，不能暴露在空气中，根据摇菌表中记录的抗生 素类型，将含相应抗生素的培养基加入96孔深孔板中，每孔加2*YT培养基1000ul 接种：（接种前将恒温震荡培养箱电源打开，设置转速为220转，温度为37摄氏度） （1） .菌液：吸取100ul菌液接入到已分好相应抗生素培养基的相应孔号，若菌液浓度 较低，则可加大接菌量，若菌有沉菌现象，可将枪头插进样品底部吹打混匀后再 接种 （2） .菌体：用枪头吸取少许接入培养基中