光化学传感器理论与实践第七章优秀课件(共73张PPT).pptxVIP

光化学传感器理论与实践第七章;第七章 生物修饰传感器;第一节 识别原理; 识别原理：在生物修饰传感器中，修饰的生物敏感层在对分析对象进行生物识别的同时，能向普通光学波导传感器或化学修饰光化学传感器提供可检测的光学信号。; 特点：与分子或离子化学识别相比，生物识别有更高的选择性与灵敏度。 ;具有生物识别功能的生物物质;酶相关知识; 酶分子上的亲核基团有Ser-OH、Cys-SH、His-咪唑基等，这些富含电子的基团(有孤对电子)，攻击底物分子中电子云密度较小的亲电子基团，并供出电子，二者形成共价键，酶和底物形成一个不稳定的中间物，进而转变为产物。;;;类别;目前主要限于：氧化还原酶，转移酶。 原因： 常常伴随有可供光学检测的物质的产生或消耗; 可直接采用普通光学波导传感器作为内传感器器件; 有时酶所催化的化学反应可能不产生或不消耗可供检测的物质，但往往伴随有易于被化学修饰光化学传感器检测的物质（例如H＋、O2、NH3等）的生成与消耗。;酶分化反应速率方程(一);酶分化反应速率方程(二);;识别过程;免疫反应;免疫反应;根据校正曲线+稳态响应信号(快响应) 第一节 识别原理 (4)大的Stokes位移； 对短的核苷酸（16或20个核苷酸链）检测范围在nM，响应速度与浓度之间存在线性关系。 例：半抗原2,4-二硝基苯(DNP) 例：半抗原2,4-二硝基苯(DNP) 可检测在酶催化反应中生成H2O2的生物活性物质(底物) 活性基团种类：组氨酸上的咪唑基、丝氨酸上的羟基、半胱氨酸上的巯基等 第二节 基于普通光学波导传感器的酶催化传感器 第四节 基于简单免疫体系的光化学传感器 ATP-荧光素-O2-荧光素酶生物发光体系 450～550个氨基酸残基，分子量约55～75kD。 第五节 基于竞争免疫体系的光化学传感器 层的净速度。 基于化学或生物发光的酶催化反应体系 乳酸+NAD?丙酮+NADH;;五种免疫球蛋白结构示意图;抗体与抗原的结合力;免疫光化学传感器响应;免疫光化学传感器响应;降低抗原-抗体结合力提高光化学传感器的可逆性;第七章 生物修饰传感器;第二节 基于普通光学波导传感器 的酶催化传感器;第二节 基于普通光学???导传感器 的酶催化传感器;;基于荧光信号检测的酶催化传感器;关于辅酶 I;分析对象;与NADH生成反应耦合;硫胺素 + H2O2;基于化学或生物发光信号检测的酶催化传感器;鲁米诺(Luminol)+H2O2化学发光体系;ATP-荧光素-O2-荧光素酶生物发光体系;NADH-黄素单核苷酸(FMN)-氧化还原酶-O2-荧光素酶 生物催化发光体系;应用;第七章 生物修饰传感器;第三节 基于化学修饰传感器的酶催化传感器;基于荧光信号检测的酶催化传感器 第一节 识别原理 (2)荧光发射光谱与背景荧光有明显差别； 需标记：无光学性质变化，进行荧光标记。 对短的核苷酸（16或20个核苷酸链）检测范围在nM，响应速度与浓度之间存在线性关系。 一般为具有较大分子量的生物活性物质，例如蛋白质、多糖、核酸等，有时为小分子活性物质(半抗原)，药物，激素，肽等。 环境因素：pH值影响(最佳：生理pH7. hn(lmax = 490nm) 固定在池壁上的待测抗原 第五节 基于竞争免疫体系的光化学传感器 第五节 基于竞争免疫体系的光化学传感器 与抗体结合的酶：碱性磷酸酯酶 1985,57,565 葡萄糖+ NAD?葡萄糖酸内酯+NADH (有荧光活性) (无荧光活性) Bright et al.;常用的内传感器种类;氧光化学传感器为基础光极的酶催化传感器;;传感器的特性;氨气酶光极传感器为基础传感器的酶催化传感器;;传感器的特性;第七章 生物修饰传感器;第四节 基于简单免疫体系的光化学传感器;1. 体系:一一对应的免疫体系；;荧光标记后的抗体（或抗原） 对标记物的要求： (1) 稳定； (2)荧光发射光谱与背景荧光有明显差别； (3)高荧光量子产率； (4)大的Stokes位移； (5)有合适的与抗原或抗体连接的法； (6)不影响抗原-抗体结合反应。 ; 主要基于抗原-抗体作用前后荧光强度的变化： 非辐射荧光能量转移：荧光熄灭 例：半抗原2,4-二硝基苯(DNP) DNP-赖氨酸 + 抗体 → DNP-赖氨酸 /抗体 (有荧光活性) (无荧光活性);辐射荧光能量转移：荧光增强 例：二甲氨基萘-5-磺酰(DANS) DANS-赖氨酸