HMGB1A-box克隆、表达、纯化及其体外作用观察的中期报告.docxVIP

HMGB1A-box克隆、表达、纯化及其体外作用观察的中期报告 本次中期报告主要介绍HMGB1A-box的克隆、表达、纯化及体外作用观察的进展情况。 1. 克隆 首先进行了HMGB1A-box基因的克隆工作。采用PCR技术，设计引物，在人类HMGB1基因的cDNA序列中扩增得到HMGB1A-box序列，然后将其克隆到pET28a(+)载体中，构建了重组蛋白表达载体。 2. 表达 将重组载体转化进大肠杆菌BL21(DE3)中，诱导表达得到了表达杆菌。经鉴定，表达杆菌的总蛋白中出现了与预期分子量匹配的蛋白条带，表明目标蛋白已经表达成功。 3. 纯化 对表达得到的目标蛋白进行Ni-NTA亲和层析纯化。通过SDS分析，发现纯化得到的蛋白具有约11 kDa的分子量，与预期相符。 4. 体外作用观察 采用Western blot和ELISA技术对纯化得到的HMGB1A-box蛋白进行了体外作用观察。Western blot结果显示，HMGB1A-box蛋白能够在体外结合到人类乳腺癌细胞MCF-7中的核H2A-H2B二聚体。ELISA结果表明，HMGB1A-box蛋白能够显著抑制MCF-7细胞的增殖，并促进细胞的凋亡。具体机制的研究将在下一步进行。 总的来说，本次实验已经成功地进行了HMGB1A-box的克隆、表达、纯化及体外作用观察等基础工作。这为后续的机制研究奠定了基础。