绵羊体细胞重编程和锌指核酶介导的GGTA1基因敲除克隆猪的研究的中期报告.docxVIP

绵羊体细胞重编程和锌指核酶介导的GGTA1基因敲除克隆猪的研究的中期报告 本研究旨在通过绵羊体细胞重编程和锌指核酶介导的GGTA1基因敲除来克隆无α-半乳糖猪，为人类器官移植提供一种新的来源。 一、材料和方法 1. 细胞培养和核质移植 选择6个月龄的花斑绵羊体细胞作为供体细胞并在离体条件下培养，得到活力较高的细胞。通过虫草素B和去氧核糖核酸后，将细胞质移植到卵母细胞中，再经过细胞融合和电融合，得到克隆胚胎。 2. GGTA1基因敲除 针对猪基因组中的GGTA1基因设计锌指核酶，利用CRISPR/Cas9技术编辑细胞中的GGTA1基因，将其敲除得到无α-半乳糖猪细胞。 二、进展情况 1. 体细胞核移植 目前已经完成绵羊体细胞核移植并获得了一些克隆胚胎。但是克隆效率较低，需要继续优化体细胞选择、核质移植和胚胎复苏等操作流程。 2. GGTA1基因敲除 经过多次实验，成功设计出了具有高编辑效率的锌指核酶，并对猪细胞进行了基因敲除。通过PCR、Western blot和流式细胞术等多种方法进行验证，证实了GGTA1基因已被完全敲除。接下来将进一步鉴定细胞的稳定性和遗传改造效果。 三、下一步工作 1. 克隆无α-半乳糖猪 在优化体细胞核移植条件的基础上，进一步实验和分析移植率、胚胎存活率等指标，争取获得更多的克隆胚胎。 2. 评估无α-半乳糖猪的稳定性和安全性 通过对所克隆的无α-半乳糖猪进行分子水平、生理功能和组织学等方面的分析，评估其稳定性，同时进行安全性评估。 四、结论 本研究成功通过绵羊体细胞核移植和锌指核酶介导的GGTA1基因敲除实现了无α-半乳糖猪的克隆，并取得了一定进展。下一步将继续推进研究，争取更好的结果。