高效液相色谱法—高效液相色谱法概念（仪器分析课件）.pptx

Contents;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;高效液相色谱法的特点;Contents;高效液相色谱法-检测器;ED;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;高效液相色谱法-检测器;Contents;项目4：头孢拉定分析（高效液相色谱法定量分析） ;子任务1：认识高效液相色谱法的特点 ;色谱图;发展历史 1903年俄国植物化学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromatography）和“色谱图”（Chromatogram）的概念。他在论文中写到：“（原文）一植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就象光谱一样，称之为色谱图。” 1930年以后，相继出现了纸色谱、离子交换色谱和薄层色谱等液相色谱技术。 1952年，英国学者Martin和Synge 基于他们在分配色谱方面的研究工作，提出了关于气－液分配色谱的比较完整的理论和方法。 1960年中后期，气相色谱理论和实践发展，以及机械、光学、电子等技术上的进步，液相色谱又开始活跃。到60年代末期把高压泵和化学键合固定相用于液相色谱就出现了HPLC。;子任务1：认识高效液相色谱法的特点 ;特点：高压、高效、高速、高灵敏度、应用范围广（表4-6） 高沸点、对热不稳定、相对分子质量大的有机及生化试样的高效分离分析方法。;气相色谱法与高效液相色谱法异同点;气相色谱法与高效液相色谱法异同点;气相色谱法与高效液相色谱法异同点;高效液相色谱按分离机理分类 液固吸附色谱 液液分配色谱 键合相色谱 凝胶色谱 离子色谱;一、液固吸附色谱 1.分离原理 组分在固定相吸附剂上的吸附作用不同进行分离 与吸附剂结构和性质相似的??分易被吸附，保留时间长，后出峰；反之，与吸附剂结构和性质差异较大的组分不易被吸附，保留时间短，先出峰。;2.固定相;选择流动相原则：极性大的试样用极性较强的流动相，极性小的则用极性弱的流动相。 极性强度的表示方法：用溶剂强度参数?°表示。;一、液液分配色谱 1.分离原理 流动相：液相 固定相：液相涂渍在惰性载体或硅胶上。 组分在固定相和流动相上的分配，分配系数K大的组分，保留时间长，后出柱。;根据固定相和流动相的相对极性的不同分类;组成 惰性载体（担体）：固体吸附剂，如硅胶、氧化铝 固定液（表4-10）;防止固定液流失的办法;3.流动相 组成 洗脱剂：溶解和分离试样 调节剂：调节极性，改变组分在柱中的移动速度和分离状态;三、键合相色谱法 键合相色谱：采用化学键合相的液相色谱法。 键合固定相：利用化学反应将各种不同的有机基团以化学键的形式连接到载体表面的游离羟基上而制得。 形成化学键合相的条件： 一是载体表面应有某种活性基团； 二是固定液应有与载体表面发生化学反应的官能团。 ;1.分离原理;2.固定相 基体：全多孔或薄壳型微粒硅胶 分类：非极性、弱极性、极性（表4-11）;四、凝胶色谱法 又称条件排阻色谱法或空间排阻色谱法。 原理：基于分子大小不同进行分离的一种色谱分析方法。分子体积大先流出，分子体积越小，保留时间越长。 固定相凝胶：化学惰性的多孔性凝胶。 应用：分离、鉴定高分子聚合物。如研究聚合机理，选择聚合工艺及条件，并考察聚合材料在加工和使用过程中相对分子质量的变化。;子任务2：熟悉高效液相色谱的分类 ;总 结 ; ; ;总结;授课任务:分10个任务，10个组，每个组出一名同学进行授课，其他组员协助、补充，回答问题。 1.熟悉高效液相色谱仪的工作流程（第一组） 2.高压输液系统： （1）贮液器（第二组） （2）高压输液泵、过滤器（第三组） （3）梯度洗脱装置（第四组） 3.进样系统（第五组） 4.分离系统（第六组） 5.检测系统: （1）HPLC检测器的要求，分类（第七组） （2）紫外-可见光检测器（第八组） （3）二极管阵列检测器、荧光检测器（第九组） （4）折光指数检测器、蒸发激光散射检测器（第十组） 6.数据处理系统;Contents;项目4：头孢拉定分析 （高效液相色谱法定量） ;子任务1：熟悉高效液相色谱工作流程 ;子任务1：认识红外光谱仪;子任务2：熟悉高效液相色谱仪组成和各部分作用