第9章生物可降解材料.pptVIP

三、酶法 基本原理与次氯酸钠法相似，即让大量的NPCM溶解而PHB不溶解，从而达到分离提纯的目的。但是由于NPCM通常包括核酸、类脂物、磷脂、肽聚糖以及蛋白质等物质，因此实际上是通过多种酶的多步或协同作用来达到消化NPCM的目的。 * 本文档共151页；当前第93页；编辑于星期三\8点50分 单独的使用酶来消化细胞中的杂质物质，所得到的PHB的纯度不高，往往要结合其他的方法，例如再用表面活性剂处理，才能得到较高纯度的PHB。该法包括细胞的热处理、酶处理和阴离子表面活性剂处理等步骤，因此操作十分复杂。 * 本文档共151页；当前第94页；编辑于星期三\8点50分 由于细胞杂质成分比较复杂，特别是酶作用的条件比较苛刻，需要处理的步骤较多、操作较为复杂，因此酶法的应用在提取成本、过程放大方面受到了很大的限制。 * 本文档共151页；当前第95页；编辑于星期三\8点50分 四、表面活性剂/次氯酸钠法 基本原理：当表面活性剂浓度较低时，其单个分子进入到细胞膜的磷脂双层中；随着表面活性剂浓度的增加，更多的表面活性剂分子结合到磷脂双层中，细胞膜的体积就会不断的增大；一旦磷脂双层中的表面活性剂饱和，再增加表面活性剂就会使细胞膜收到破坏，表面活性剂与磷脂形成大量的胶团，胞内PHB物质释放出来。 * 本文档共151页；当前第96页；编辑于星期三\8点50分 冷冻干燥菌体表面活性剂破胞 离心过滤分离 次氯酸钠洗涤 离心过滤分离 水洗 离心过滤分离 烘干 产品 * 本文档共151页；当前第97页；编辑于星期三\8点50分 该方法能够比较方便的实现在水相中提取PHB，这是它的突出优点，但要使用大量的表面活性剂，而且次氯酸钠的使用不可避免的造成了PHB的降解。 * 本文档共151页；当前第98页；编辑于星期三\8点50分 五、其他方法 基因工程技术重组大肠杆菌生产PHB的方法，用氨水从这类细胞中提取PHB就是其中的一种方法。 * 本文档共151页；当前第99页；编辑于星期三\8点50分 各种提取PHB的方法比较 * 本文档共151页；当前第100页；编辑于星期三\8点50分 （一）降解机制 1 胞内降解 胞内PHB的代谢是个循环过程。 图7-9中第四步到第七步是降解过程。首先(第四步)胞内无定形PHB颗粒在解聚酶作用下降解，形成单体和二聚体的混合物。二聚体随之在二聚体水解酶作用下形成单体。 五、PHAs的生物降解 * 本文档共151页；当前第101页；编辑于星期三\8点50分 2 胞外降解 聚—羟基丁酸(PHB)的胞外降解有两种机制， 在无菌条件下通过水解进行。这种机制对于PHB在医疗方面的应用(如作为药物的缓适载体、手术缝线等)特别重要。 在自然环境中，是酶降解机制。许多细菌和真菌可分泌外解聚酶，有些甚至可以利用PHB作为唯一碳源生长。 * 本文档共151页；当前第102页；编辑于星期三\8点50分 （二）PHB（聚—羟基丁酸）在环境中的降解 影响PHB降解速度的因素较多 包括环境类型：微生物种群及活力，水份，温度 塑料制品性质：厚度，表面组织形态，孔隙度，制品中的第二组分,如填充料、颜料 在自然环境中，能降解PHB的微生物包括细菌、放线菌、和霉菌等。 J.Mergaertd等在土壤中发现有295种微生物可降解PHB，包括105种革兰氏阴性菌，36种革兰氏阳性菌，68种放线菌和86种霉菌。 * 本文档共151页；当前第103页；编辑于星期三\8点50分 研究表明，在一定的范围之内，PHB （聚—羟基丁酸）的降解速度与温度呈正相关，其降解可以分为两个阶段。第一阶段相对分子量下降；第二阶段是相对分子量下降到13000后开始腐蚀。 * 本文档共151页；当前第104页；编辑于星期三\8点50分 环境中有许多微生物能降解PHB，但每种的数量不一定很多，活力不一定很高。当PHB出现在环境中后，经过一定的迟滞期，能降解的PHB的微生物会逐渐增多，活力升高，降解的速度增快。 * 本文档共151页；当前第105页；编辑于星期三\8点50分 表7-10 PHB （聚—羟基丁酸）在环境中的降解 * 本文档共151页；当前第106页；编辑于星期三\8点50分 通常情况下，PHB厌氧降解比有氧降解快 真养产碱杆菌在厌氧条件下，主要代谢产物是乙酸和R—3—羟基丁酸，乙酰CoA转变成乙酸的同时生成ATP。 而在有氧情况下，乙酰CoA完全分解成CO2和H2O，