基于yfp报告基因的砷抗性全细胞传感器的构建及表达的中期报告.docxVIP

基于yfp报告基因的砷抗性全细胞传感器的构建及表达的中期报告 本研究旨在构建一种基于yfp报告基因的砷抗性全细胞传感器，在该传感器中，yfp报告基因将作为砷抗性的标志。在中期报告中，我们已经完成了传感器的构建和初步表达的实验。 首先，我们通过PCR方法从大肠杆菌中克隆了arsR基因，并将其插入到表达载体中，构建出了含有arsR基因的pUC19-arsR质粒。然后，我们将yfp基因插入到该质粒中，构建出了pUC19-arsR-yfp质粒，其中yfp基因与arsR基因通过IRES序列相连，并与pUC19-arsR-yfp质粒中的Kan^R抗性基因同向表达。最后，我们通过转化实验，将pUC19-arsR-yfp质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。通过PCR和酶切实验验证，我们确保了质粒在转化后的正确性和完整性。 接下来，我们进行了初始的表达实验。大肠杆菌BL21(DE3)菌株在LB培养基中培养至OD_600=0.5时，加入0.1 mM砷酸盐，继续培养4小时。然后，我们收集并离心菌体，得到了细胞质提取物。通过荧光光谱方法测定，我们发现在0.1 mM砷酸盐诱导下，yfp基因表达量明显增加。同时，通过加入不同浓度的砷酸盐进行比较，我们发现砷酸盐浓度与yfp表达量呈正相关关系，表明该传感器对砷酸盐的检测具有良好的灵敏度。 总体来说，我们已经成功构建了基于yfp报告基因的砷抗性全细胞传感器，并初步验证了其功能。在下一阶段的研究中，我们将进一步优化条件并探究更广泛的砷浓度范围下该传感器的表现。