半抗原与蛋白质偶联技术.pptVIP

碳化二亚胺法交联原理 本文档共50页；当前第31页；编辑于星期三\2点49分 碳化二亚胺法交联原理 本文档共50页；当前第32页；编辑于星期三\2点49分 人工抗原合成方法 2、含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联 1）戊二醛法：双功能试剂戊二醛的两个醛基分别与半抗原和蛋白质上的氨基形成schiff键(-N=C，在半抗原和蛋白质间引入一个5碳桥。这一反应条件温和，可在4～40℃及pH6.0～8.0内进行，操作亦简便，因此应用广泛。 2）重氮化法：用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO2和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物。 本文档共50页；当前第33页；编辑于星期三\2点49分 戊二醛法合成人工抗原的原理 本文档共50页；当前第34页；编辑于星期三\2点49分 盐酸克伦特罗重氮化反应原理 本文档共50页；当前第35页；编辑于星期三\2点49分 目录 抗原与半抗原 偶联蛋白 人工抗原合成的方法 影响人工抗原质量的因素 人工抗原的质量评定 本文档共50页；当前第1页；编辑于星期三\2点49分 抗原与半抗原 本文档共50页；当前第2页；编辑于星期三\2点49分 抗原 抗原 ——能与淋巴细胞抗原受体（TCR/BCR）特异性结合，刺激机体产生特异性免疫应答，并与相应免疫应答产物（指抗体或致敏淋巴细胞）在体内、外发生特异性结合反应的物质。 本文档共50页；当前第3页；编辑于星期三\2点49分 抗原的分类 天然抗原 如：细菌、病毒、真菌、寄生虫等。 人工抗原 如：人工结合抗原、人工合成抗原、 基因工程抗原 本文档共50页；当前第4页；编辑于星期三\2点49分 常见的天然抗原-细菌 链球菌 痢疾杆菌 霍乱弧菌 伤寒杆菌 本文档共50页；当前第5页；编辑于星期三\2点49分 常见的天然抗原-病毒 狂犬病病毒 腺病毒 口蹄疫病毒 流感病毒 本文档共50页；当前第6页；编辑于星期三\2点49分 常见的其他天然抗原 真菌 白色念珠菌 (1,000X oil) 疟原虫 本文档共50页；当前第7页；编辑于星期三\2点49分 常见的其他天然抗原 异种动物血清 异嗜性抗原 血型抗原 主要组织相容性抗原 肿瘤抗原 　超抗原 本文档共50页；当前第8页；编辑于星期三\2点49分 人工抗原 人工结合抗原 ——将无免疫原性的简单化学基团与蛋白质载体偶联，或将无免疫原性的有机分子与蛋白质载体结合，形成载体-半抗原结合物，均属人工结合抗原。 本文档共50页；当前第9页；编辑于星期三\2点49分 人工抗原 人工合成抗原 ——用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽。（应用这种人工合成多肽可研究氨基酸种类、序列与蛋白质抗原性及免疫原性的关系。） 本文档共50页；当前第10页；编辑于星期三\2点49分 人工抗原 基因工程抗原 ——通过基因重组、再表达制备的抗原物质。 如：目的基因（编码抗原）+ 载体（质粒等）? 重组DNA ? 细胞（真核或原核）? 表达 ? 纯化 ? 基因工程疫苗 本文档共50页；当前第11页；编辑于星期三\2点49分 抗原的性质 1.免疫原性： 抗原刺激机体产生特异性免疫应答，诱生相应抗体和效应淋巴细胞的能力。 2.抗原性: 抗原可在体内、外与相应的抗体/效应淋巴细胞发生特异性结合，产生免疫应答的特性。 本文档共50页；当前第12页；编辑于星期三\2点49分 抗原（按照免疫原性及免疫反应性）分类 1、完全抗原 : 既有免疫原性又有抗原性的物质，如多数蛋白质分子。 2、半抗原:又称不完全抗原，单独存在时只具有抗原性而无免疫原性的物质，如二硝基酚、青霉素。 本文档共50页；当前第13页；编辑于星期三\2点49分 完全抗原 半抗原与载体结合后可使其具有免疫原性。 半抗原+载体 完全抗原 本文档共50页；当前第14页；编辑于星期三\2点49分 半抗原 + 载体 抗体 B T 完全抗原 B B B T 本文档共50页；当前第15页；编辑于星期三\2点49分 常见的偶联蛋白 本文档共50页；当前第16页；编辑于星期三\2点49分 常见的偶联蛋白 常用来作为合成人工抗原的载体蛋白质有： 牛血清白蛋白(BSA)、 卵清蛋白(OA)、 钥孔血蓝蛋白(KLH)、 人血清白蛋白(HSA) 人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。 本文档共50页；当前第17页；编辑于星期三\2点49分 常见的偶联蛋白 牛血清白蛋白（BSA） 包含583个氨基酸残基， 分子量为66.43kDa， 等电点为4.